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小善缘225

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[求助] 酶活测定问题

想请教一下大家

测纯酶酶活问题
导入不同工程菌株中异源表达目的蛋白，再测定酶活时。两种做法哪种更合理可行呢？
1.测定比酶活时，先测定酶液的蛋白浓度，在将其稀释到同一水平，进行酶活测定。
2.测定比酶活时，直接向酶反应体系中加入相同体积的酶液，进行酶活测定。
计算比酶活时:酶活力（U/L)÷蛋白浓度（ mg/L )

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1楼 2024-02-23 14:56:39

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

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按理说都一样，一般是稀释成相同浓度。
保证测酶活时候，需要保证其他底物，cofactor或者下游一些偶联反应的酶都是大过量的。只有加入酶的量是限定的，所以如果按照方法2的话也得稍微估算一下，保证酶不要加太多。

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

2楼2024-02-24 09:23:35

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小善缘225

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2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2024-02-24 09:23:35
按理说都一样，一般是稀释成相同浓度。
保证测酶活时候，需要保证其他底物，cofactor或者下游一些偶联反应的酶都是大过量的。只有加入酶的量是限定的，所以如果按照方法2的话也得稍微估算一下，保证酶不要加太多。

那我现在一个蛋白浓度2000mg/L，一个1000mg/L。这差的太远，就需要先稀释，在测定酶活。

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3楼2024-02-26 16:55:37

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