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maomi520

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[交流] 【讨论】GC进样也是一技术活，如何尽快掌握这项技术？？

GC进样也是一技术活：初试进针时，常会遇到扎不动或将针打歪等情况，重复性不好、交叉污染等也是常有的事。如何尽快掌握这项技术，还请各位大侠多提点建议和窍门！

以下转载资料权且作为抛砖引玉：

1、注射速度快
注射速度慢时，会使样品的汽化过程变长，导致样品进入色谱柱的初始谱带变宽。正确的注射方法应当是：取样后，一手持注射器（防止汽化室的高气压将针芯吹出），加一只手保护针尖（防止插入隔垫时弯曲），先小心地将注射针头穿过隔垫，随即以最快的速度将注射器插到底，与此同时迅速将样品注射入汽化室（注意不要使针芯弯曲），然后快速拔出注射器。注射样品所用时间及注射器在汽化室停留的时间越短越好，且每次注射的过程越重现越好。

2、取样准确而重现
即取样量要准确，抽取样品的速度要重现，以保证进样的重现性。特别是黏度大的样品，要避免在注射器中形成气泡。防止产生气泡的办法是将注射器插入样品溶液，多次推拉针芯，推下时要快，拉起时要慢。最后可能会有很小的气泡在针管中，不易除去。这时可以取多于实际进样量的样品（比如，进样量为1μl，可取 2－3μl样品），然后将针尖朝上，用手指轻轻弹击针管气泡就会跑到液体的上方。再将多余的样品推出针管，气泡也就排出去了。这跟护士打针时避免将空气注射进体内的道理是一样的。要使取样量准确，也是这样倒置注射器，使视线与针管中的液面处于同一水平上。然后，推压针芯到所需刻度。至于针尖外面粘附的一部分样品，可用一片滤纸快速擦拭而除去（注意不能让滤纸吸去针管内的样品），也可不管它，因为它会被进样隔垫擦去（但这会加速隔垫的老化），而隔垫的问题则由隔垫吹扫来解决。

3、避免样品之间相互干扰
如果进样时注射器内有上一个样品的残留组分，就会干扰下一个样品的分析，带来定量误差。在色谱中这叫做记忆效应，是必须消除的。具体办法是洗针。取样前先用样品溶剂洗针到少3次（抽满针管的三分之二，再排出）。再用要分析的样品洗针至少3次，然后取样（多次上下抽动），这样基本上可消除记忆效应。如果同时几个样品进行分析，且要交替进样（如用外标法分析时，可能对标样和实际样品交替进样），则最好是每个样品各使用一个注射器，既能避免样品之间的相互干扰，又不至于消耗太多的样品（可用的样品量小时，这是要考虑的问题）。

4、选择合适的注射器
GC分析最常用的是10μl微量注射器，其进样量一般不要小于1μl。如果进样量要控制在此1μl以下，就应采用5μl或者1μl的注射器．此时要注意，5μl或1μl的注射器往往是将样品抽在针尖内，因此观察不到针管中的液面，故很可能抽入气泡．取样时反复推拉针芯，以确保针尖内没有气泡。

5、减少注射歧视　
所谓注射歧视是指注射针插入GC进样口时，针尖内的溶剂和样品中的易挥发组分首先开始汽化；无论注射速度多快，不同沸点的组分总是有汽化速度的差异。当注射完毕抽出针尖时，注射器中残留样品的组成就与实际样品的组成有所不同。显然，高沸点组分残留的要多一引起。换句话说，进入色谱柱的样品中的高沸点组分含量可能低于实际样品，从而造成定量分析的误差。如果能保证每次进样的速度严格一致辞（如用自动进样器），经标样校正后，可忽略这一歧视作用。但用手动进样时，这是难以达到的。所以必要时应使用热针进样或溶剂冲洗进样技术。前者是指取样前先将注射针插入汽化室预热一定时间，然后再按正常方法进样；后者则是取样前先在注射器中抽入一定量的溶剂，再抽取样。这样在注射样品时，溶剂有可能将样品全部冲洗进入汽化室。相比之下，溶剂冲洗进样的操作较为简单有效，但应注意所用溶剂量太大会造成色谱柱超载。

[ Last edited by maomi520 on 2009-10-14 at 18:00 ]

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