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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR的问题
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
一切请都在冰上操作
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11楼2009-10-15 13:39:05
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
★ ★
liujichao(金币+1):谢谢参与
liujichao(金币+1,VIP+0): 10-15 16:40
这种情况正常，我的办法是用原来p出条带的模板和PCR产物做模板多做几个管重新P。加的酶，dNTP，ddH2o先预混比较好。
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12楼2009-10-15 16:33:50
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qfzhang

银虫 (小有名气)
★ ★
liujichao(金币+1):谢谢参与
liujichao(金币+1,VIP+0): 10-15 17:08
换个房间，有时候换个地方，完全一样的条件 结果死活不一样。无奈了
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13楼2009-10-15 16:50:38
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liulangnmg

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
liujichao(金币+1):谢谢参与
liujichao(金币+2,VIP+0): 10-16 08:44
我做过几年的PCR，最初的时候确实也出现了楼主所说的情况，好像PCR还与运气有关。
现在我反对这种说明，只做出来过一次，而不能重复，那么第一次的条件在以后的过程中是否完全重现了？这是一个很重要的问题，特别是TaqE的用量，因其黏度比较高（含有50%）的甘油，只做几个很容易导致因枪头粘了很多而无形中增加了酶的用量。
建议：
抛开第一次的结果，重新实验，包括实验的条件，如TaqE用量，Reaction buffer的用量作个梯度。
至于是否在冰上操作，本人持保留意见。科学的结果就是要有可重现性，冰上与否与结果没有直接的关系。最多只能算是锦上添花。锦都没有，花再多也会烂掉。
至于模板，如果是RNA，存在降解的可能；而如果是DNA通常都不会降解，除非你实在太不小心了--直接加了DNAase。
如果可能，重新提取模板。
Wish U good luck!
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14楼2009-10-15 17:07:57
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lfj

木虫 (小有名气)
★
liujichao(金币+1):谢谢参与
多试几次看看，有时候是会这样哦
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15楼2009-10-15 20:53:51
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luckyan110

★ ★
liujichao(金币+1):谢谢参与
liujichao(金币+1,VIP+0): 10-18 09:03
模板浓度有些大啊 这样的情况蛮常见的 很正常 实验要多次重复才行啊 切忌着急哦
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16楼2009-10-17 10:54:53
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
liujichao(金币+1):谢谢参与
liujichao(金币+1,VIP+0): 10-18 09:03
看marker有带没？多做几个平行试验
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17楼2009-10-17 11:01:04
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xj22667

银虫 (小有名气)
★
liujichao(金币+1):谢谢参与
我个人认为问题应该出在模板和酶上吧 把这两个都换一下 其它的一般都没什么问题
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18楼2009-10-17 19:03:22
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your2007

至尊木虫 (著名写手)
★
liujichao(金币+1):谢谢参与
换个同学帮你做下，说不定就又出了
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爱人者被爱，敬人者人敬
19楼2009-10-17 19:07:28
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zier1011

木虫 (著名写手)
★
liujichao(金币+1):谢谢参与
有可能是模板降解了，但不排除你操作失误
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花还香香的
20楼2009-10-17 23:32:41
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