PCR的问题 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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gyesang

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一切请都在冰上操作

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11楼2009-10-15 13:39:05

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fykxy_206

木虫 (正式写手)

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★ ★
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liujichao(金币+1,VIP+0): 10-15 16:40

这种情况正常，我的办法是用原来p出条带的模板和PCR产物做模板多做几个管重新P。加的酶，dNTP，ddH2o先预混比较好。

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12楼2009-10-15 16:33:50

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qfzhang

银虫 (小有名气)

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★ ★
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换个房间，有时候换个地方，完全一样的条件结果死活不一样。无奈了

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13楼2009-10-15 16:50:38

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liulangnmg

铁虫 (小有名气)

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liujichao(金币+2,VIP+0): 10-16 08:44

我做过几年的PCR，最初的时候确实也出现了楼主所说的情况，好像PCR还与运气有关。
现在我反对这种说明，只做出来过一次，而不能重复，那么第一次的条件在以后的过程中是否完全重现了？这是一个很重要的问题，特别是TaqE的用量，因其黏度比较高（含有50%）的甘油，只做几个很容易导致因枪头粘了很多而无形中增加了酶的用量。
建议：
抛开第一次的结果，重新实验，包括实验的条件，如TaqE用量，Reaction buffer的用量作个梯度。
至于是否在冰上操作，本人持保留意见。科学的结果就是要有可重现性，冰上与否与结果没有直接的关系。最多只能算是锦上添花。锦都没有，花再多也会烂掉。
至于模板，如果是RNA，存在降解的可能；而如果是DNA通常都不会降解，除非你实在太不小心了--直接加了DNAase。
如果可能，重新提取模板。
Wish U good luck!

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14楼2009-10-15 17:07:57

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