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乳腺增生动物模型
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乳腺增生(Mammary Gland Hyperplasia,MGH)常见于25-40岁的中青年妇女,随着生活节奏加快、社会压力增大及受生育率下降的影响,其发病率逐年增高且占乳房疾病的75%。由不良精神刺激等因素引发,导致内分泌功能紊乱,雌孕激素比例失衡。在药物治疗上,最常用他莫昔芬,但副作用大,长期服用易致月经不调、闭经等不良反应。 一、动物的选择 主要为大、小鼠、家兔、豚鼠等。现以大鼠、小鼠、家兔更为常用。 二、造模方法 1、雌二醇与黄体酮制备大(小)鼠、家兔乳腺增生模型 1.1原理 内分泌及卵巢相关功能出现失调。雌激素与孕激素长期刺激乳腺组织,使其不能由增殖转入复旧,从而诱导乳腺组织增生。 1.2方法 ①雌性未孕SD大鼠,体重190~200g,大鼠按剂量-0.5mg·kg-1·d-1肌内注射苯甲酸雌二醇; 给药25d后按剂量4mg·kg-1·d-1肌内注射黄体酮,共计5d。于第31天可成功制备大鼠乳腺增生模型。该模型可维持不少于40d。 ②雌性未孕大鼠,体重220~250g,大鼠按剂量0.25mg·kg-1·d-1腹腔注射苯甲酸雌二醇,共计15次; 按剂量4mg·kg-1·d-1腹腔注射黄体酮,共计5d。第36天,可制备大鼠乳腺增生模型。该模型可维持不少于40d。 ③雌性小鼠,体重18~22g,小鼠按剂量0.5mg·kg-1·d-1腹腔注射苯甲酸雌二醇,共计25d; 随 后按剂量4mg·kg-1·d-1肌内注射黄体酮,共计5d。第31天可制备小鼠乳腺增生模型。该模型持续不少于40d。 ④未孕雌性新西兰白兔,体重2.0~2.5kg,家兔按剂量0.5mg·kg-1肌注苯甲酸雌二醇,每天1次,连续25d; 随后按剂量1mg·kg-1肌注黄体酮,隔天1次,共3次。于第31天可制备家兔乳腺增生模型。该模型持续不少于2周。 2、雌激素与孕激素联用 + 激怒刺激制备大鼠肝郁型乳腺增生模型 2.1原理 雌激素和孕激素联用可致大鼠乳腺增生,激怒可致大鼠出现肝郁,两者结合,可形成肝郁型乳腺增生模型。 2.2方法 6月龄大鼠,雌性,大鼠按剂量0.5mg·kg-1·d-1肌内注射苯甲酸雌二醇,连续25d; 随后肌内注射黄体酮(4mg·kg-1·d-1),共计5d。在第1次造模的同时,用鼠夹夹尾,激怒大鼠,刺激持续30min,每天1次,连续30d。于第35天可成功制备大鼠肝郁型乳腺增生模型。该模型持续不少于2周。 3、二甲基苯蒽(DMBA)+ 颈部佩带枷具制备大鼠肝郁血瘀型乳腺非典型增生模型 3.1原理 DMBA可使大鼠乳腺组织的终末芽体不是向腺泡芽体分化,而是呈现导管内增生。颈部佩带枷具可致大鼠出现神情痴呆、郁郁寡欢、反应迟钝、不爱运动,继而出现肝郁血瘀症状。两者结合,形成肝郁血瘀型乳腺非典型增生模型。 3.2方法 未育SD雌性大鼠,鼠龄为出生后40d左右。于造模第1天,按剂量100mg·kg-1一次性灌服DMBA,制作大鼠乳腺非典型增生模型。大鼠正常喂饲,于第1周大鼠颈部佩带枷具(选取直径4.5mm软硬适中的胶皮套铁丝制成枷锁,从一侧腋下环绕至颈部呈斜跨式,每24h左右交替佩戴,使之有束缚感,确保长时间佩戴并不伤皮毛),共8周。于第55天,制备肝郁血瘀型乳腺非典型增生模型。该模型持续不少于2周。 三、模型指标 1、病理学标:乳腺增生模型制备成功后乳腺组织会出现明显增生,乳腺小叶体积增大,乳腺小叶中腺泡及小导管出现扩张,小导管及小叶内腺泡数增多,互相靠近至融合; 腺泡的上皮细胞数目增多; 毛囊鞘根细胞中度增生,皮肤基底细胞增生成团块状,皮脂腺数增多。病理指标是乳腺增生的最直观证据,是乳腺增生模型成功与否的核心指标。权重系数设定为0.4。 2、表观指标:乳腺增生慢性的表观指标有大鼠第2或3对乳头竖起较坚实,有乳晕,乳头直径和高度显著增大,乳头竖起充血; 在第3周达肿胀高峰,第4周肿胀度持平,在第5周开始下降。动物易怒、易躁动。表观指标在乳腺增生疾病临床诊断中具有重要地位,是乳腺增生模型成功与否的直接相关指标,权重系数设定为0.3。 3、生化指标:多数乳腺增生造模成功后机体生化指标也会发生相应变化,如血清促性腺激素释放激素(Gn-RH),促卵泡激素(FSH),催乳素(PRL),雌二醇(E2),5-羟色胺(5-HT)水平增加,血清孕酮(P)含量减少; 乳腺组织雌激素受体(ER),孕激素受体(PR)的蛋白表达量显著增加等。必要时加测血液流变学指标。生化指标是乳腺增生模型发生、发展、恢复过程的机体反映,检测指标多,是模型成功与否的间接相关指标,权重系数设定为0.3。 |
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