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iriswqh

[交流] 【求助】毛细管凝胶电泳检测蛋白质

小弟最近在帮别人做一个项目,刚开始学用毛细管凝胶测蛋白质,但是在标准样品时就遇到了问题,buffer平衡之后 run标样却未见出峰。。buffer平衡和run标样出来的图谱差不多。。
   
我原来是用别人涂布好的柱子,都能正常出峰后来柱子断了,就自己做了个新的,之后就出现了这个问题。
   
仪器是BECKMAN P/ACE, 用MAPS(bind-silane)/ 聚丙烯酰胺涂布的柱子,UV200nm。电流稳定在9-10uA

标样的浓度应该是足够大了, 3.0uM/L 。buffer为Dextran溶解在 SDS+Tris+ CHES中,浓度均参考文献常用,所以溶液在使用前都经过过滤和脱气。

照理说我已经涂布过了,蛋白质吸附应该不会太厉害了吧,为什么样品峰基本看不到?但是实在想不出有别的理由。同样的检测条件上个柱子就能出峰。
另外关于柱子的涂布,请问制备线性聚丙烯酰胺涂布的时候,一般灌入丙烯酰胺后放置多久才可以冲洗呢。过硫酸铵加入量 2mg/mL, 会不会有点少?

[ Last edited by iriswqh on 2009-10-13 at 22:34 ]
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