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iriswqh

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[交流] 【求助】毛细管凝胶电泳检测蛋白质

小弟最近在帮别人做一个项目，刚开始学用毛细管凝胶测蛋白质，但是在标准样品时就遇到了问题，buffer平衡之后 run标样却未见出峰。。buffer平衡和run标样出来的图谱差不多。。

我原来是用别人涂布好的柱子，都能正常出峰后来柱子断了，就自己做了个新的，之后就出现了这个问题。

仪器是BECKMAN P/ACE，用MAPS（bind-silane）/ 聚丙烯酰胺涂布的柱子，UV200nm。电流稳定在9-10uA

标样的浓度应该是足够大了， 3.0uM/L 。buffer为Dextran溶解在 SDS+Tris+ CHES中，浓度均参考文献常用，所以溶液在使用前都经过过滤和脱气。

照理说我已经涂布过了，蛋白质吸附应该不会太厉害了吧，为什么样品峰基本看不到？但是实在想不出有别的理由。同样的检测条件上个柱子就能出峰。
另外关于柱子的涂布，请问制备线性聚丙烯酰胺涂布的时候，一般灌入丙烯酰胺后放置多久才可以冲洗呢。过硫酸铵加入量 2mg/mL，会不会有点少？

[ Last edited by iriswqh on 2009-10-13 at 22:34 ]

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1楼 2009-10-13 22:24:29

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