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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取树突状细胞
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实验痛苦中

新虫 (小有名气)

[求助] 提取树突状细胞

有人提取过树突状细胞吗，我第一次提取，后面收集不了，离心的时候沉淀几乎看不见，我是用三只小鼠的腿铺了六孔板，第二次重新提取，也是三只小鼠，但是加上了它们的脊柱，但是我第四天去半量换液的时候，发现离心也没有啥沉淀，这是我那一步出现了问题呀，下面是我第一次和第二次提取细胞的图

提取树突状细胞


提取树突状细胞-1


提取树突状细胞-2


提取树突状细胞-3


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1楼 2024-01-16 19:34:47
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
建议继续培养，有可能是死细胞，污染看能不能动

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2楼2024-01-17 08:19:25
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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4楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-01-19 15:25:28
这是昨天新提取的（一个是脊柱提的，一个是小鼠腿提的），用九只铺六孔板了，刚刚培养14小时左右，这个细胞形态对吗，密度可以吗（20倍镜下看的）


...

换液没？这密度有点大，传一下吧

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5楼2024-01-20 22:42:18
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
长得怎么样

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7楼2024-01-23 09:55:00
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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8楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-01-24 17:31:40
腿提的，长的还行，密度也可以，今天半量换液，有细胞沉淀，但是脊柱的不行，从上次全量换液，到这次半量换液，细胞长的和从腿提取的有点不一样，也没有细胞沉淀
...

换液每次留下十分之一原液，有利于生长

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9楼2024-01-26 00:29:08
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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11楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-01-26 11:15:45
我全量换液的时候，留了大概500ul，半量换液的时候，留了细胞沉淀和一半的上清，这时候细胞沉淀也很多，但是我第七天收集的时候，发现细胞沉淀就很少了，以第五天那个离心转速根本无法离心下来，然后我加大转速到3 ...

你离线劲大了，别超过2000

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12楼2024-01-27 09:47:35
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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13楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-01-27 17:30:54
是因为离心转速过大，导致细胞碎片过多是吗，细胞碎片过多是不是会影响测的数据，我还有一个疑问，就是我第五天半量换液的时候，细胞沉淀还有很多，低速离心下来的，但是到了第七天我收集的时候，反而不行了，细胞 ...

收集完尽快收集数据，不要培养起来没完没了

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14楼2024-01-27 19:52:49
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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15楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-01-28 14:43:14
我是培养七天的，第三天全量换液了一次，第五天半量换液，准备第七天收集的，但是发现第五天半量换液的时候细胞沉淀很多，第七天收集的时候就没有那么多了，我第五天的细胞沉淀也没有不要，我是又重悬了放回去，再 ...

我们一般都是培养五天再换液，其实五天的时候你看看结果，如果贴壁了就收，三天有点短，而且要少看

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17楼2024-01-31 03:41:02
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至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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18楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-01-31 09:24:55
树突状细胞不是前面三四天是贴壁，后面就变成半贴壁或者悬浮吗
...

看你目的是什么，如果转染之类的你需要贴壁，如果收集细胞，尽快吧

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19楼2024-02-01 01:13:18
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至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
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20楼: Originally posted by 实验痛苦中 at 2024-02-01 14:41:31
我就是收集细胞，做一系列的细胞实验，例如细胞毒性，成熟，摄取这样的，我看别人都是培养六七天这样的收集，因为从小鼠提取的原代，里面会有巨噬细胞，淋巴细胞这些，通过换液，可以剔除这些细胞
...

建议多做点，然后收集用的靠流式，顺带培养点拍照用，我的意思明白了没

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25楼2024-02-01 20:33:26
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