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膜性肾病小鼠模型构建
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膜性肾病（membranous nephropathy，MN）是临床上常见的成人肾病综合征病理类型之一，好发于中老年人，是引起成人肾病 综合征的最常见的病因，以肾小球基膜上皮细胞侧 出现含免疫球蛋白的电子致密沉积物伴肾小球毛细 血管壁弥漫增厚为特点的肾脏疾病。 研究该疾病模型最常用的是Heymann大鼠肾炎模型，但不能成功地应用在小鼠，且人体内并不存在megalin抗原复合物。今天小助手给宝子们梳理一下通过给小鼠尾静脉注射C-BSA制备膜性肾病动物模型，综合临床检查和病理检查建立全面的小鼠膜性肾病的鉴定方法。 一、动物的选择 6周龄，健康成年雄性BALB/c小鼠。 二、造模方法 小鼠给予0.2mg C-BSA和等体积的弗氏完全佐剂充分乳化成乳白色悬液，多点皮下注射。2周后，小鼠尾静脉注射C-BSA（13mg/kg），每周3次，隔日注射。 小鼠免疫后6周，收集其尿液、血液和肾标本做进一步的分析。测定小鼠的尿蛋白、血甘油三酯、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、尿素、低密度脂蛋白、胆固醇和肌酐等。 同时处死小鼠，将小鼠肾组织分成三部分，分别进行PASM染色、免疫荧光和电镜。取一部分肾组织经中性甲醛固定，石蜡包埋，常规切片，作PASM 染色和小鼠的IgG的免疫荧光染色。采用间接荧光染色方法进行IgG染色: 将切片置于避光的湿盒内，PBS清洗后，滴加100μL 自发荧光淬灭剂，37℃，60min。PBS清洗后，滴加兔抗小鼠的 IgG（1∶200）4℃ 孵育过夜。待PBS清洗后，每张切片加入DyLight TM488标记的山羊抗兔荧光二抗（1∶100），室温下避光孵育60min。PBS 清洗后，缓冲甘油封片，荧光显微镜下观察。将一部分的肾样品切成2mm×2mm的小条，放入25g/L的戊二醛固定，而后进行脱水、置换、浸透、聚合、切片、染色、超薄切片，透射电镜观察。 |
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