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细胞工厂对小鼠胚胎成纤维细胞的复苏传代-富道细胞
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今天富道细胞给大家介绍一种我们在细胞制备中常见的细胞那就是小鼠胚胎成纤维细胞此胚胎干细胞体外培养时最理想的饲养层，用于小鼠、人来源胚胎干细胞培养，也广泛诱导多潜能干细胞（iPS）培养的饲养层细胞。今天富道细胞分享一下细胞工厂对小鼠胚胎成纤维细胞的应用。 我们在使用细胞工厂培养细胞时候，要先进行细胞复苏。将冻存的 MEF 从液氮中取出，浸入 37 ℃ 水浴，轻轻转动，注意冻存管盖不要没入水中。当只剩一个小冰晶时，将冻存管从水浴中取出。将冻存管浸入 95％ 乙醇浴消毒，在无菌超净台中晾干。将细胞从冻存管中转入离心管中，逐滴加入 MEF-C 培养基，轻轻混匀（5）200 g 离心 5 min，去除冻存液。去除上清液，将细胞团轻轻拍散，加MEF-C重悬细胞。将细胞悬液转移到无明胶包被的细胞工厂中。放入培养箱，每天观察细胞工厂内的细胞密度。 MEF 细胞的在细胞工厂中的传代（按 1:5 传代）：吸弃细胞工厂内添加的 MEF-C。加PBS，洗一遍。吸弃 PBS。加入胰蛋白酶-EDTA 溶液，放置一段时间后直至镜下观察，看细胞间接触由致密逐渐变松散。轻摇晃细胞工厂内细胞，直至MEF细胞从细胞工厂贴壁表面脱离。加 MEF-C 中止胰蛋白酶消化。混匀细胞悬液，加入 MEF-C。混匀后分装到每个新的细胞工厂中。 |
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