| 查看: 331 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
有没有同仁在做木霉菌的农杆菌介导转化？求交流！！！
|
|||
|
做了三次实验，都没有得到阳性克隆。 我的实验具体步骤如下： 1、 农杆菌的活化培养： 将含目的质粒的根瘤农杆菌AGL-1在含抗生素（kan 50μg/ml，carb 100μg/ml）的LB培养基上划线，挑取单克隆进行液体培养（LB培养基，kan 50μg/ml，carb 100μg/ml），28度，36-48h；收集菌体，用IM培养基（即共培养基）稀释至OD660=0.15，28度，200rpm培养4-6h； 2、 里氏木霉菌的转化： 用 5-8ml无菌水从培养 4～7d的PDA斜面上洗下木霉菌的孢子，棉花过滤得到孢子悬液，血球计数板计数，然后用无菌水调节孢子浓度。取 100μl活化的农杆菌菌液和100μl稀释的孢子悬液混合，涂布在共培养平板的滤纸片（或硝酸纤维素膜）上 , 24-25度培养 48-60h。将滤纸揭下，反铺到含 100μg/ml 潮霉素B 和150μg/ml 头孢霉素的选择性 PDA 平板上 , 28 度培养48h。揭下滤纸 , 28 度继续培养 5～7d。 孢子悬液浓度取3个梯度：106、107、108/ml；预培养的农杆菌的OD660取四个梯度：0.40（约4h）、0.48（约5h）、0.55（约6h）、0.645（约7h）。滤纸和硝酸纤维素膜做转膜材料，单独涂布里氏木霉作为空白对照。 真的不知道是什么原因，诚心求教！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂
已经有32人回复
-
化工学硕294分，求导师收留
已经有16人回复
-
考研英一数一338分
已经有7人回复
-
302求调剂
已经有6人回复
-
271求调剂
已经有25人回复
-
266调剂
已经有10人回复
-
生物学调剂
已经有11人回复
-
求调剂
已经有8人回复
-
085801电气专硕272求调剂
已经有10人回复
-
一志愿南科大生物学297分，求调剂推荐
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2009-10-12 22:14:48
3楼2009-10-13 09:30:27
liuliangyu027
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 104.9
- 帖子: 56
- 在线: 5.9小时
- 虫号: 420783
- 注册: 2007-07-13
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2009-10-15 22:06:47
