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细胞摇瓶在液体菌种生产中的应用-富道细胞
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作为一种细胞培养耗材，细胞摇瓶广泛应用于微生物学和细胞生物学等领域，在液体菌种生产中也用到了细胞摇瓶，其生产流程如下： 1、培养基制备 马铃薯250克，洗净削皮加水1500毫升煮至熟而不烂，四层纱布过滤取汁1000毫升，然后加入葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，维生素B1两片，消泡济0·3毫升，煮至完全溶解以后停止加热。 2、装瓶 将煮好的液体菌种培养基静止，等待其中固态物沉淀以后取上清液装细胞摇瓶，装瓶的时候需要注意的是要用漏斗放到细胞摇瓶上，然后将培养液延漏斗倒入瓶内，防止营养液粘到瓶口或接近瓶口的瓶壁上。装入量为细胞摇瓶标注量的60%即可。 3、制作封口棉塞 塞细胞摇瓶瓶口的棉塞的松紧程度要求塞入瓶口4到5厘米之间，提起棉塞轻轻晃动细胞摇瓶不脱落为宜，然后再将棉塞用两层纱布包好，纱布四角两两树对系在一起，名用线缝合，再塞入细胞摇瓶内。然后外面再包四层报纸，用三根胶圈套好。 4、灭菌 将准备好的细胞摇瓶放入高压锅内，拧好螺栓，开始加热，初期放汽阀打开，等到放汽阀持续稳定排汽时关闭排汽阀，当压力达到0·04兆帕时将排汽阀缓缓打开排气，压力降至0时关闭排汽阀，当压力达到015以后，安全阀第一次排汽开始计时30分钟，停止加热，等到压力自然降至0时打开排汽阀，拧开螺栓，将高压锅盖打开三分之一，利用锅体余热烘干报纸水分，放到超净工作台上或接种箱里准备接种。 5、接种 将准备好的摇瓶母种与灭好菌的摇瓶培养基一同放入超净工作台或接种箱里，按常规方法消毒处理以后开始接种。接种时先将试管断桥前端的培养基用酒精灯火焰消毒处理过的无菌（以下简称无菌）接种钩取出扔掉，然后用无功接种铲铲薄薄一层带有菌丝的菌种二厘米长一块，揭开细胞摇瓶报纸，拔下棉塞，注意棉塞用左手无名指和小脂夹住，保持棉塞塞入瓶口部分朝向手脂背面，操作的过程中严格禁止棉塞触碰未经消毒的物品。用接种钩将铲好的菌种块钩入细胞摇瓶内，一定要保持菌种落入细胞摇瓶时有比丝的那一面向上，飘浮于细胞摇瓶中的液体之上。然后将棉塞经过酒精灯火焰消毒处理以后再塞入细胞摇瓶瓶口，盖好报纸，套上胶圈。 6、静止培养 接好种以后要轻拿轻放，尽量保持平稳，将细胞摇瓶放到25-28度的环境中闭光培养48-72小时，因品种不同而培养时间不同，每天注意检测是否感染杂菌，如果发现感染即可淘汰不用。 7、摇床培养 已经萌发好没有杂菌感染的细胞摇瓶放到摇床上进行培养，回旋式摇床摇出来的菌球均匀，便于检查杂菌。根据菌种的不同回旋速度也不同，一般情况下控制在160-200次之间即可。在实际生产中本着先慢后快的原则进行培养。根据不同菌种的生长速度调结回旋速度。 |
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