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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：双向电泳高手请进~~
汕头大学海洋科学接受调剂
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cinderella3866

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助：双向电泳高手请进~~

请问：按照伯乐电泳系统操作手册上，提取蛋白加入裂解液后，要加入DNase和RNase去除DNA和RNA，请问用法用量？DNase和RNase要再配的吗？谢谢谢谢谢~~~~
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1楼 2009-10-12 16:57:48
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-12 20:44
这个......首先声明我不是高手，仅仅做过一点双向。

呃，那个DNase和RNase...我提取蛋白质的时候从来没用过。首先DNA和RNA在双向电泳过程中影响并不大，然后，DNase和RNase都是蛋白质，而且工作浓度还比较高，明显会影响最后的图谱。所以，我认为可以不加，特别是RNase，RNA本来就容易降解嘛......
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2楼2009-10-12 18:02:09
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gandalf886

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-12 20:44
2楼说的很不负责任。
可以加的，去丁香园看看，那里很多做双向的
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3楼2009-10-12 20:24:34
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
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引用回帖:
Originally posted by gandalf886 at 2009-10-12 20:24:
2楼说的很不负责任。
可以加的，去丁香园看看，那里很多做双向的

~我只是给个意见而已。最多你觉得不靠谱......不负责任这个罪名也太大了吧

这两个酶当然可以加，最多多出几个额外的蛋白质点，你要是愿意，还可以加外标呢。但是加了酶有多大帮助，我觉得得看情况...
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4楼2009-10-13 09:05:50
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zier1011

木虫 (著名写手)
我觉得二楼说的有道理，RNAase根本就没多大必要加，你要是相加，呵呵，也没人拦着
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花还香香的
5楼2009-10-15 11:33:17
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wqy_850513

银虫 (初入文坛)
★
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呵呵，RNA本来就是很易降解的，至于DNA，反正我从来都不去除它们，一般也是没有事情的，还有就是老外的话也不能全信的，他们总是那么小心，厂家则是希望你多买药品，越轨越好，要是你愿意也可以试试看蛋白提纯试剂盒的
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6楼2010-01-09 20:28:19
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cinderella3866

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wqy_850513 at 2010-1-9 20:28:
呵呵，RNA本来就是很易降解的，至于DNA，反正我从来都不去除它们，一般也是没有事情的，还有就是老外的话也不能全信的，他们总是那么小心，厂家则是希望你多买药品，越轨越好，要是你愿意也可以试试看蛋白提纯试剂 ...

是哦，我给公司打电话咨询，他们就建议我买试剂盒，推荐说有全蛋白提取试剂盒，还有配套的除杂试剂盒……死贵死贵的……呵呵，请问你也做双向嘛？
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7楼2010-01-20 13:31:25
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lenhy

新虫 (初入文坛)
★
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我是做植物的，我们提取蛋白时一直没有加过这两种酶。如果你认为DNA的量太多影响胶的美观，你可以试试超声破碎，至于RNA，是个很容易降解的东西。加这两种酶可能会影响后期的取点和质谱结果分析吧
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8楼2010-01-20 14:33:38
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pptony113

铜虫 (小有名气)
★
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没有必要加了 做了几年了 从没加过 不受影响 伯乐的ge的都用过
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9楼2010-01-20 15:00:42
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