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cinderella3866

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助:双向电泳高手请进~~

请问:按照伯乐电泳系统操作手册上,提取蛋白加入裂解液后,要加入DNase和RNase去除DNA和RNA,请问用法用量?DNase和RNase要再配的吗?谢谢谢谢谢~~~~
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

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amisking(金币+2,VIP+0): 10-12 20:44
这个......首先声明我不是高手,仅仅做过一点双向。

呃,那个DNase和RNase...我提取蛋白质的时候从来没用过。首先DNA和RNA在双向电泳过程中影响并不大,然后,DNase和RNase都是蛋白质,而且工作浓度还比较高,明显会影响最后的图谱。所以,我认为可以不加,特别是RNase,RNA本来就容易降解嘛......
2楼2009-10-12 18:02:09
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gandalf886

银虫 (小有名气)

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amisking(金币+3,VIP+0): 10-12 20:44
2楼说的很不负责任。
可以加的,去丁香园看看,那里很多做双向的
3楼2009-10-12 20:24:34
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


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引用回帖:
Originally posted by gandalf886 at 2009-10-12 20:24:
2楼说的很不负责任。
可以加的,去丁香园看看,那里很多做双向的

~我只是给个意见而已。最多你觉得不靠谱......不负责任这个罪名也太大了吧

这两个酶当然可以加,最多多出几个额外的蛋白质点,你要是愿意,还可以加外标呢。但是加了酶有多大帮助,我觉得得看情况...
4楼2009-10-13 09:05:50
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zier1011

木虫 (著名写手)

我觉得二楼说的有道理,RNAase根本就没多大必要加,你要是相加,呵呵,也没人拦着
花还香香的
5楼2009-10-15 11:33:17
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wqy_850513

银虫 (初入文坛)


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呵呵,RNA本来就是很易降解的,至于DNA,反正我从来都不去除它们,一般也是没有事情的,还有就是老外的话也不能全信的,他们总是那么小心,厂家则是希望你多买药品,越轨越好,要是你愿意也可以试试看蛋白提纯试剂盒的
6楼2010-01-09 20:28:19
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cinderella3866

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wqy_850513 at 2010-1-9 20:28:
呵呵,RNA本来就是很易降解的,至于DNA,反正我从来都不去除它们,一般也是没有事情的,还有就是老外的话也不能全信的,他们总是那么小心,厂家则是希望你多买药品,越轨越好,要是你愿意也可以试试看蛋白提纯试剂 ...

是哦,我给公司打电话咨询,他们就建议我买试剂盒,推荐说有全蛋白提取试剂盒,还有配套的除杂试剂盒……死贵死贵的……呵呵,请问你也做双向嘛?
7楼2010-01-20 13:31:25
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lenhy

新虫 (初入文坛)


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我是做植物的,我们提取蛋白时一直没有加过这两种酶。如果你认为DNA的量太多影响胶的美观,你可以试试超声破碎,至于RNA,是个很容易降解的东西。加这两种酶可能会影响后期的取点和质谱结果分析吧
8楼2010-01-20 14:33:38
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pptony113

铜虫 (小有名气)


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没有必要加了 做了几年了 从没加过 不受影响 伯乐的ge的都用过
9楼2010-01-20 15:00:42
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