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andywang6137

木虫 (著名写手)

[交流] 酶标仪测蛋白和酶活力问题请教

1、酶标仪测蛋白时,样品比空白对照OD值低(考马斯亮蓝试剂盒),这是什么原因?
2、测过氧化氢酶活力,样品OD值比对照高(实际上应该是对照比样品高,最后计算公式是对照OD-样品OD,就出现负值),也用的试剂盒,这是什么原因?

3、比色孔加样量不一致随测定结果有无影响?比如理论加样200ul,实际加样估计在100--200(150--200)之间,为了不产生气泡,枪头里最后一些溶液是没有全部加入比色孔,导致每孔的测定样品体积不一致,而酶标仪的光路是垂直的(具体不太了解)。我测定的同一样品结果还是有些变动的。

    新人请教各位高手,谢谢!
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chensir7806

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★ ★ ★ ★
andywang6137(金币+5,VIP+0):谢谢 11-12 16:02
1、可能是你测的时候出错了,只不过我原来好像也遇到这样的问题,这时候肯定要重新测。多设置上几个平行同时测,求平均值。
考马斯亮蓝试剂盒加样,测定速度要快。
2楼2009-10-11 21:23:59
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andywang6137

木虫 (著名写手)

样品的顺序没有问题,实验结果肯定没法用,我现在就是想弄明白什么原因,免得下次又出现同样的问题。我的样品量很少,所以采用酶标仪,计算着来,不能浪费。要不然,分光光度计就可以测定了。
3楼2009-10-11 21:31:30
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