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96孔板接种细胞步骤
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为了做实验，细胞铺匀是常见的一种。然而，有许多人不是很成功，分布也不均匀:要么中间密集，周围稀疏，要么周围密集，中间秃顶。以下是利用96孔板把细胞铺匀，希望对大家有用! 方法/步骤 1、通常，在96孔板的每个孔中加入100微升细胞悬浮液。 从底部附近的井的左侧添加细胞悬浮液。 加入一半平板后，混合细胞悬液，不要再加入，继续加入剩余的一半平板。 添加完所有板后，盖上板，用左手轻轻握住板的左侧，用右手轻轻轻敲板的右边缘，注意抓力(我通常轻敲三次)。 如果它太强或太多次，细胞就会被浓缩和堆积。 顺时针旋转盘子(逆时针效果不好)，依次敲击剩余的三面，静置约5分钟，放入37度培养箱中。 对于6孔板、12孔板或24孔板，我在第一个孔中加入少量无血清培养基，摇动并渗透到整个孔的底部，然后用移液管枪将整个孔的底部吸到第二个孔中。用同样的方法渗透到井底，同时模拟其它井，这样整个井底都是湿的，细胞悬浮液将平放在整个井底。 加入细胞悬液时，可以避免中间加入更多细胞，中间加入更少细胞的现象，细胞分散更均匀。 注意，加入细胞悬液后，细胞悬液应放在工作台上静置。这个方法有点慢，但是当你熟练的时候它并不慢。也可以涂抹，但强度不如96孔板，效果不如96孔板，所以我放弃了渗透井底的方法。 2、加入细胞悬液后，抬起细胞培养板，从底部向上观察光线，看细胞是否聚集。然后从底部敲击以分散它。 3、如果实验室有平板振荡器，建议用这个仪器轻微振荡。 效果好，即振幅小、频率高。 4、细胞应该尽可能分散，大多数细胞处于单一状态。离心后，完全悬浮!有转移到六孔板上的，就是震动!摇晃时，不要让细胞液转向，否则细胞会全部被带到中间而不均匀! 5、当一瓶细胞装满后，进行正常处理。 将它均匀地吹进培养瓶中，然后铺上6孔板，每孔2ml。 涂抹后，不用观察直接用酒精棉擦拭，然后放入培养箱中。 稍微向左三圈，向右三圈，先三圈，然后三圈。基本上，24小时后，每个孔中的细胞将非常均匀。 6、计算所有所需的液体和细胞数量，混合均匀，并将其添加到六孔板中。 六孔板呈水平8字形波动。 在显微镜下观察。 如果不均匀，按照上述方法再次摇动。如果细胞没有计数并直接种植，在种植六孔板的过程中随时摇动混合瓶。 我通常顺时针或逆时针转动瓶子。 7、先上下移动，然后在水平板上左右移动，每个方向移动5-6次，但关键是摇动后直接放入培养箱，不要做太多的运动，如照镜子，否则很容易在中间再次聚在一起。 公众号：毕合生物 毕合生物（www.bihebio.com)提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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