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小白keidnx

铜虫 (初入文坛)

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[交流] CRISPR-dCpf1

请问，CRISPR-dCpf1系统中的crRNA载体上有质粒维持蛋白ccdB，对大肠杆菌会有致死性吗?我选择NdeI酶切,一步克隆在ccdB启动子上游350bp左右插入一个荧光基因GFP，化转入DH5α中。测序结果显示片段是插入了，但是ccdB直接突变缺失，是我操作有问题吗还是什么原因。我使用的这个CRISPR-dCpf1是在谷棒中成功应用的，crRNA载体和dCpf1载体是大肠和谷棒穿梭质粒，我现在实验的目的是验证是否能在大肠中成功抑制gfp的荧光表达。

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