| 查看: 369 | 回复: 2 | |||
[交流]
Transwell侵袭实验步骤已有1人参与
|
|
1. 实验准备 提前12 h将Matrigel放到4℃融化，将实验用到的枪头、EP管等材料提前放到-20℃预冷；实验前准备冰盒，整个实验操作过程置于冰上进行； 2. 包被基底膜 在冰上将Matrigel胶用无血清的细胞培养基进行稀释，混匀后加入小室中，注意动作轻柔，不要产生气泡，将小室放入CO2培养箱中孵育2h备用； 3. 水化基底膜 将孵育完成的小室中上室多余的液体小心吸掉，每孔中加入100 μL无血清培养基，在培养箱中放置30 min。 4. 接种细胞 a. 将状态良好的细胞进行消化，离心，用PBS洗1-2遍，用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度至1-10×105/ml（需要做预实验确定具体的细胞密度）； b. 在下室中加入500μL的含10%FBS的培养基，将小室小心放入24孔板内，在上室中加入细胞悬液100 μL-200 μL，放入培养箱中（需要做预实验确定具体的培养时间）。 5. 固定染色、拍照及计数 a. 到时间点后将小室取出，用PBS清洗小室，用棉签轻柔擦去上室细胞和Matrigel后，用4%多聚甲醛固定或甲醇20 min，将小室适当风干，用0.1%结晶紫染色30 min，PBS清洗3遍，于37℃干燥。 b. 将小室置于显微镜下，随机选取5个视野，拍照并计数。 |
回复此楼» 猜你喜欢
共同通讯谁投稿？
已经有7人回复
-
优秀毕业论文 指导教师，普通老师有希望吗？
已经有11人回复
-
博士复试，申请成绩复核，有机会翻盘吗？
已经有23人回复
-
经常觉得挺累的
已经有16人回复
-
蹲一个男朋友
已经有54人回复
-
人生
已经有11人回复
-
女博士高校择业三天之内签合同，求支招
已经有33人回复
-
答辩
已经有8人回复
-
审不上青基又非升即走的青椒 和 牢里踩缝纫机的犯人哪个活的更舒服一点？
已经有22人回复
-
山东省基金：作为项目负责人承担面上项目数量累计不得超过2项
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
|
谢谢分享 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-10-17 15:29:40
 |
3楼2023-11-01 08:42:51
10