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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有没有大佬懂Elisa测微生物特定酶活性的原理？
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huozhazha

铜虫 (正式写手)

[求助] 有没有大佬懂Elisa测微生物特定酶活性的原理？ 已有1人参与

有没有大佬懂Elisa测微生物特定酶活性的原理？

说明书如下：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中硝酸盐还原酶（Nar）水平。用纯化的硝酸盐还原酶（Nar）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入硝酸盐还原酶（Nar），再与HRP标记的硝酸盐还原酶（Nar）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的硝酸盐还原酶（Nar）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中硝酸盐还原酶（Nar）的活性浓度。

比如我想测硝酸盐还原酶（Nar），那我测得的结果，是Nar的浓度？还是总量？还是活性？

还有就是这种酶的测定结果和相关的基因表达有什么关系呢？

急求，十分感谢！
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1楼 2023-10-04 16:02:04
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qzhyang2008

捐助贵宾 (正式写手)
哈哈。这个对学生物的人来说不是很简单的吗、
其实是用450nm的吸光度值表征的的：硝酸盐还原酶（Nar）活性浓度
如果你知道加入的量的话，也就是活性酶的总量。
最终都是用标准曲线来表示的。
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2楼2023-10-04 16:38:34
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酸程程之

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

ELISA一般是测含量，测酶活性得用生化。
当然现在市面上还是能找着不少用ELISA测酶活性的乱象。

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的分析生物样品中特定抗原或者抗体含量的技术。在这个测试过程中，目标抗原或抗体会经过专门设计的过程进行结合和检测，并通过酶-底物反应产生可以测得的信号强度。这个强度与被测试的目标抗原或抗体的浓度成正相关。
虽然ELISA涉及到有酶参与的反应（通常与检测抗体相关），但该实验本身并不评价酶活性。其目的主要是量化特定的抗原或抗体的含量，而非测定酶的活性。
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生命以负熵为生
3楼2023-10-08 15:23:29
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