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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌规模发酵生产初期自溶，希望大家给支招
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
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大肠杆菌规模发酵生产初期自溶，希望大家给支招
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我最近遇见的问题是，大肠杆菌培养过程中，摇瓶种子罐生长都正常，进入发酵罐培养2-3h时菌体出现溶氧、pH回升，OD下降的情况，但是过9-16h后，发酵罐菌体会重新生长，目标产物单位也正常。这个问题是突然出现的，我们之前发酵陪养条件都没有改动过。已经连续出现该问题多次了，生产过程中，我们也尝试用原始菌种进行接种，但同样会出现这个问题，目前想不出办法了。感觉不是噬菌体引起的。

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1楼 2023-09-30 07:31:51
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yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
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引用回帖:
22楼: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 09:13:25
不会吧，溶氧回升后，过一段时间还会下降，继续生长
...

可能是葡萄糖用完了，开始用其他糖了。需要一个时间的转变。

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26楼2023-09-30 09:28:25
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
61楼: Originally posted by 后来就算 at 2023-10-08 12:24:16
1、菌种是工程菌吗---一般质粒导入的有出现二次生长情况。可考虑抗生素浓度
2、营养物质消耗完毕与代谢物的切换---考虑培养基的组成，种子培养基与发酵培养基是否差距较大；另就是，接种后前期OD是否较高，可考虑适 ...

出现这个现象会较大的延迟培养时长

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62楼2023-10-09 12:03:19
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zyzhen

铁虫 (初入文坛)
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我们遇到过同样的问题，后来不加抗生素会好一些。自溶的机率会降低。
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66楼2023-10-11 14:40:41
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小C：O

新虫 (初入文坛)
★
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污染了，之前碰到过这样，杂菌影响了本菌的生长，出现自溶在，做噬菌斑检测，以为是噬菌体，过几个小时后又会重新生长，后面我们改了尾气就解决了

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88楼2023-12-21 12:45:45
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yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
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噬箘体貌似不会涨回来，是不是在那个时间加诱导剂了。

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5楼2023-09-30 07:50:30
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 11:50:30
噬箘体貌似不会涨回来，是不是在那个时间加诱导剂了。

没有，在加诱导剂之前，也没有补料，这个时间点上没有任何操作

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7楼2023-09-30 07:51:48
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yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 07:51:48
没有，在加诱导剂之前，也没有补料，这个时间点上没有任何操作
...

可能糖没了

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17楼2023-09-30 08:47:58
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 12:47:58
可能糖没了
...

不会吧，溶氧回升后，过一段时间还会下降，继续生长

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22楼2023-09-30 09:13:25
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yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
22楼: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 09:13:25
不会吧，溶氧回升后，过一段时间还会下降，继续生长
...

没不加什么吗

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24楼2023-09-30 09:23:46
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 13:23:46
没不加什么吗
...

除了移种，没有其他操作

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25楼2023-09-30 09:25:42
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yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
25楼: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 09:25:42
除了移种，没有其他操作
...

额，你这解释有点乱。

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27楼2023-09-30 09:29:56
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 13:29:56
额，你这解释有点乱。
...

我也没解释，，移种至发酵罐后，什么操作都没有

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29楼2023-09-30 09:35:31
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草办雨田

新虫 (小有名气)
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你是几级发酵？发酵罐基料中有葡萄糖和甘油吗？还是有别的碳源？

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55楼2023-10-01 22:55:26
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
55楼: Originally posted by 草办雨田 at 2023-10-02 02:55:26
你是几级发酵？发酵罐基料中有葡萄糖和甘油吗？还是有别的碳源？

两级发酵，摇瓶接种子罐，种子罐移发酵罐，碳源用的是葡萄糖

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56楼2023-10-02 12:57:59
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后来就算

金虫 (小有名气)
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1、菌种是工程菌吗---一般质粒导入的有出现二次生长情况。可考虑抗生素浓度
2、营养物质消耗完毕与代谢物的切换---考虑培养基的组成，种子培养基与发酵培养基是否差距较大；另就是，接种后前期OD是否较高，可考虑适当下调一些。


最后，“目标产物单位也正常”是什么意思，那之前的现象还是个问题吗
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61楼2023-10-08 08:24:16
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
66楼: Originally posted by zyzhen at 2023-10-11 18:40:41
我们遇到过同样的问题，后来不加抗生素会好一些。自溶的机率会降低。

谢谢指导，我们种子罐加抗生素，发酵罐不加抗生素

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71楼2023-10-14 18:55:50
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xiaomengms

铁虫 (初入文坛)
★
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应该不是噬菌体，如果是噬菌体的话，2到3小时后镜检就看不到目标菌了。是不是刚开始你的发酵培养条件不合适

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74楼2023-10-20 20:00:10
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xiaomengms

铁虫 (初入文坛)
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引用回帖:
26楼: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 09:28:25
可能是葡萄糖用完了，开始用其他糖了。需要一个时间的转变。
...

利用葡萄糖不会这么快

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75楼2023-10-20 20:02:33
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
74楼: Originally posted by xiaomengms at 2023-10-21 00:00:10
应该不是噬菌体，如果是噬菌体的话，2到3小时后镜检就看不到目标菌了。是不是刚开始你的发酵培养条件不合适

我也是怀疑菌体不适应新环境

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76楼2023-10-21 10:30:38
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qbin1304

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主解决这个问题了吗，我们也会遇到这个问题，出现的时间有时候是4-5小时，有时候9-10小时
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79楼2023-11-03 11:35:13
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寒乐乐

新虫 (小有名气)
★
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可能是种子活性差，降低接种量试试
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83楼2023-11-25 14:02:26
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402222903

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种就两种原因一般，菌株构建不好，工艺还不适应
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89楼2023-12-28 16:38:13
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沙漠肥牛

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们也遇到类似的问题，而且是两个罐，同一个种子，接种到发酵罐，一个有这个现象，一个正常发酵。可以确定的是不是噬菌体，但是找不到根本的原因。
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95楼2024-02-05 16:33:40
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
88楼: Originally posted by 小C：O at 2023-12-21 16:45:45
污染了，之前碰到过这样，杂菌影响了本菌的生长，出现自溶在，做噬菌斑检测，以为是噬菌体，过几个小时后又会重新生长，后面我们改了尾气就解决了

我们的问题现在解决了，推测原因可能是两个：1）菌种冷冻管存在杂菌（对菌种进行了纯化）；2）菌种培养环境污染（我们更换了接种间、摇床培养间等）。从24年初至现在没有再出问题。
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100楼2024-11-15 15:25:52
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songyu986楼
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小C：O87楼
2023-12-21 12:39   回复  
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一眼万年xx90楼
2023-12-31 00:53   回复  
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大壮贼壮91楼
2024-01-02 13:17   回复  
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lilei_jj92楼
2024-01-06 15:53   回复  
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袅袅兮793楼
2024-01-21 22:45   回复  
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Elben-G94楼
2024-01-24 01:57   回复  
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PAINZ1496楼
2024-02-18 23:30   回复  
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嘻嘻，发酵97楼
2024-02-22 17:14   回复  
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嘿嘿哈哈工99楼
2024-02-26 14:40   回复  
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