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细胞冻存保种要注意哪些?
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1.密切观察细胞的生长密度,当细胞密度即将达到其生长密度极限时进行换液,以便第二天进行保种; 2.消化前进行冻存液配制,切勿用培养基和血清重悬细胞后再加入DMSO,这样会导致局部高浓度的DMSO对细胞产生损伤; 3.消化前预估细胞的数量,加入适量冻存液,以使细胞密度为1-2*10E6/ml,密度过高会导致冻存保护液不足,密度过低会导致冻存液对细胞有毒性; 4.梯度降温盒必须提前复温至室温,切勿从-80℃取出即可使用,这样会导致细胞全部死亡; 5.离心速度和时间依据具体细胞决定。 |
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