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Transwell侵袭实验步骤
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1. 实验准备 提前12 h将Matrigel放到4℃融化，将实验用到的枪头、EP管等材料提前放到-20℃预冷；实验前准备冰盒，整个实验操作过程置于冰上进行； 2. 包被基底膜 在冰上将Matrigel胶用无血清的细胞培养基进行稀释，混匀后加入小室中，注意动作轻柔，不要产生气泡，将小室放入CO2培养箱中孵育2h备用； 3. 水化基底膜 将孵育完成的小室中上室多余的液体小心吸掉，每孔中加入100 μL无血清培养基，在培养箱中放置30 min。 4. 接种细胞 a. 将状态良好的细胞进行消化，离心，用PBS洗1-2遍，用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度至1-10×105/ml（需要做预实验确定具体的细胞密度）； b. 在下室中加入500μL的含10%FBS的培养基，将小室小心放入24孔板内，在上室中加入细胞悬液100 μL-200 μL，放入培养箱中（需要做预实验确定具体的培养时间）。 5. 固定染色、拍照及计数 a. 到时间点后将小室取出，用PBS清洗小室，用棉签轻柔擦去上室细胞和Matrigel后，用4%多聚甲醛固定或甲醇20 min，将小室适当风干，用0.1%结晶紫染色30 min，PBS清洗3遍，于37℃干燥。 b. 将小室置于显微镜下，随机选取5个视野，拍照并计数。 |
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