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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体构建问题
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 载体构建问题

植物表达载体构建过程中，需要用到中间载体pbluescript sk+，外源片段及中间载体是经过双酶切后再连接的，弱弱的想问下，中间载体sk+经酶切之后是否需要去磷酸化？

[ Last edited by amisking on 2009-10-9 at 17:33 ]
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
1楼 2009-10-09 16:37:54
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 10-9 18:31
完全不需要去磷。去磷的主要目的是在经过酶切产生平末端或者单酶切产生相同的粘性末端时，去磷使载体不能发生自连，从而大大减少假阳性出现的概率。
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2楼2009-10-09 17:29:05
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salooloo001

至尊木虫 (文坛精英)
看书吧
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3楼2009-10-09 17:29:26
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
双酶切不需要进行载体磷酸化，直接连就行了，单酶切的话，就要将载体进行碱性磷酸酶处理了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-10-09 18:30:38
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
lz要补充的理论不少哎
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小木虫之有关部门负责人
5楼2009-10-09 18:39:21
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yangym1123

木虫 (小有名气)
对，双酶切不需要磷酸化，酶切完全后之间回收连接
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6楼2009-10-10 08:38:58
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