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PCR新手必看
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最近学习定量PCR和数字PCR，然后就遇到各种PCR技术，PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR，有几个长得好像，怎么区分呢？今天一举搞定它。 01、普通PCR PCR是普通PCR，以双链DNA为模板，以dNTP为底物，特异性地扩增双链DNA。然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行检测，只能做定性分析。 02、实时荧光定量PCR qPCR和Real-time PCR是实时荧光定量PCR，以cDNA为模板，以dNTP为底物，对扩增出的DNA进行定量分析。实时荧光定量PCR常用的方法：水解探针法和荧光染料法。 03、逆转录PCR RT-PCR 是逆转录PCR，采用 Oligo（dT） 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA，再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增，结果只能定性，不能定量。 04、实时荧光定量逆转录PCR RT-qPCR是实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR+RT-PCR的组合，将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板，以dNTP为底物，进行qPCR的定量分析。 05、数字PCR dPCR是数字PCR即三代PCR，是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术，基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元（纳升级）中，使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子，然后加入荧光信号进行扩增，从而实现靶标核酸分子的绝对计数，提高检测灵敏度和准确度。 Q 各种PCR的全称 A: ① 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） ②实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR） ③ 逆转录PCR（RT-PCR） ④实时荧光定量逆转录PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 数字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR） |
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