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微生物检验中培养基制备的注意事项
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配制要求 正确按要求制备培养基是做好微生物检验的基础。实验人员使用商品化脱水合成培养基配制培养基时，要严格按照产品说明进行配制，并做好配制记录。在配制过程中，实验人员需要严格遵守相关操作标准，佩戴口罩进行操作，避免吸入含有有毒物质的培养基粉末，称量、溶解应使用专门的角匙，不使用金属制品，避免金属离子混入培养基，影响微生物生长；准确称量后，应先加入适量的水充分溶解，再加水至所需量进行加热，加热中应不断搅拌，防止培养基在容器底部积聚；调节pH值，分装到比培养基体积最少大 20%的容器中，按说明要求进行灭菌。粉末状态的培养基开封后应存放在阴凉干燥处，及时使用，环境湿度过大会使培养基出现受潮、结块、污染等情况。对于琼脂类培养基，可采用沸水浴或流动蒸汽的加热方式进行融化，但反复冻融只允许进行1次。 配制用水 水是配制培养基不可或缺的一部分，一般使用纯化水。还应定期检查培养基配制用水的微生物污染情况，应符合纯化水要求。 灭菌 灭菌能确保培养基质量达标，实验室常采用湿热灭菌法，培养基应按照产品使用说明要求进行灭菌，每次灭菌需放置压力蒸汽灭菌化学指示卡，验证灭菌效果。一些培养基可以通过煮沸的方式进行灭菌，如结晶紫中性红胆盐琼脂培养基、亚硫酸铋琼脂培养基。实验人员应及时将培养基从灭菌锅中取出，尽快冷却至所需温度，防止加热过度，对实验数据造成影响；要检查培养基的pH值、色泽、均匀度等指标，确保符合要求后贴上标签，标明名称、日期、效期等基本信息。 制备 制备平板时，将灭菌后的培养基倾注于灭菌过的干燥平皿中，在平皿中形成至少3mm的厚度，直径90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的琼脂培养基，需要保存或培养超过48h的培养基应倾注更多培养基 。培养基冷却凝固后应立即使用或储存，储存时应标记好培养基名称及制备日期，密封后放置在2～8℃冰箱中。制备斜面培养基时，应先将培养基分装到试管中，通常每管加入10mL培养基，高压灭菌，在培养基冷却凝固前将试管倾斜一定角度放置，待冷却凝固后方能使用和保存。对于液体培养基，根据使用要求直接分装至三角瓶或试管中，灭菌，冷却至室温直接使用或保存。 培养基的储存 验收入库的培养基应严格按照生产厂家标明的储存条件、保存期限、使用方法保存和使用。开封后的商品化脱水合成培养基要放置在密闭容器中保存，在瓶身注明首次开封日期 。实验室自制培养基应避光、干燥保存，需冷藏的培养基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存时间通常为2～4 周，瓶装及试管装培养基保存时间一般为3～6个月，具体效期应进行验证。每次使用培养基前，要观察颜色变化、流动性、均匀性、是否结块和是否污染等情况。如果发现培养基出现受潮、结块、其他性状明显改变的情况，应停止使用。 |
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