| 查看: 440 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
重叠延伸PCR
|
|||
|
请教重叠延伸PCR的实验技术及原理 [ Last edited by amisking on 2009-10-9 at 19:43 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
论文撤稿了
已经有8人回复
-
博士申请
已经有7人回复
-
青B发送上会通知了吗
已经有8人回复
-
化学专业申博
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
评审有感
已经有27人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
09021122
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2064.5
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 518
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 856621
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+6,VIP+0): 10-9 12:56
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+6,VIP+0): 10-9 12:56
|
重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来.此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶处理,可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物.重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计.重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。 以下是重叠延伸PCR的原理及两基因的引物设计： A基因： 上游（F1）与开放阅读框起始密码子附近的序列相对应，并在5 ’末端添加酶切位点和3个保护碱基；下游（R1）与B基因终止密码子附近的序列及A基因5’末端起始密码子附近的序列互补，并去除A基因的终止密码子TAA B基因： 上游（F2）与A基因终止密码子附近的序列及B基因5 ’端起始密码子附近的序列相对应，同样去除A基因终止密码子TAA；下游（R2）与B基因的开放阅读框终止密码子序列互补，并在5’末端添加酶切位点和2个保护碱基。 先分别用F1、R1，F2、R2扩增出A和B基因，然后再用F1和R2将两基因连接起来，得到融合基因。 |
2楼2009-10-09 12:40:07
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- BioEPI: 8
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
3楼2009-10-09 19:18:45
honglanbai
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5803.2
- 散金: 21
- 红花: 1
- 帖子: 453
- 在线: 66.8小时
- 虫号: 478698
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 催化化学
4楼2011-08-19 12:57:08
honglanbai
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5803.2
- 散金: 21
- 红花: 1
- 帖子: 453
- 在线: 66.8小时
- 虫号: 478698
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 催化化学
5楼2011-08-19 13:22:55
10