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huangqihong铁虫 (小有名气)
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[交流]
有关感受态细胞DH5a的基因型 已有2人参与
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有个问题请教各位高手。 就是E.coli DH5a的基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1中，deoR，recA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，gyrA96都代表什么意思？recA1是指缺失还是存在recA基因？ 谢谢各位指教。 |
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huangqihong
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F-，F 因子缺失 φ80dlacZΔM15，lacZDM15（Lactose）Map position：8 min功能：lacZM15是表达β-半乳糖苷酶α片断的一段基因，当M15缺失（△M15）时，lacZ基因虽然能表达ω片断，但不能表达α片断，β-半乳糖苷酶没有活性。当带有lacZ（α片断）基因的lac操纵子通过载体DNA（如pUC19 DNA）转化到lacZ△M15基因型的细胞 (如E.coli JM109）时，在有IPTG (异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情况下, β-半乳糖苷酶表现出活性,它能分解X-gal (半乳糖类似物)，使其呈现蓝色。因此可以通过平板上的蓝白菌落进行克隆体的鉴定。 Δ(lacZYA-argF)U169， deoR，功能：deoR 是大肠杆菌中deo 操纵子的调节基因，它表达的阻遏蛋白对deo 操纵子具有重 要的调控作用。deo 操纵子位于大肠杆菌基因图谱100 min 的位置，它含有deoA、deoB、deoC 和deoD 等结构基因，分别表达DNA 代谢所需的酶类，即胸腺嘧啶磷酸化酶、磷酸 转位酶、脱氧核糖磷酸醛缩酶和嘌呤核苷磷酸化酶。deoR 基因的变异，使deo 操纵子的阻遏蛋白不能表达，宿主细胞合成大量的dCTP，可以选择性地改善大分子DNA 的转化。 recA1，recA (Recombination) 减少克隆DNA的非特异性重组。 功能：recA 基因表达ATP 依赖型DNA 重组酶，它在λ-噬菌体与基因组DNA 的溶原重组时起作用，同时具有对DNA 放射性损伤的修复功能。由recA 基因的变异所产生的基因型使同源或异源DNA 的重组不能进行，保持插入DNA 的稳定性，对DNA 的转化有利。一个菌株的基因型如果是recA，则说明此菌株的表现型是重组缺陷的。 endA1，endA (Endonuclease) 无Endonuclease I 酶活性，有利于质粒的纯化。功能：endA 基因表达非特异性核酸内切酶I，它能使所有DNA 双链解开，在DNA 的复制和重组中起重要作用。endA 基因的变异将使插入的外源DNA 更加稳定，提取的质粒纯度更高。 hsdR17(rk-，mk+)，限制缺陷，修饰正常 可使 DNA 甲基化，但不限制外源 DNA 。hsdR (Host specificity defective)功能：hsdR 基因表达I 型限制酶EcoK (K12 株) 或EcoB (B 株)，在大肠杆菌细胞中起到一种“抗体”的作用，对外来的各种 DNA 有严格的限制。HsdR 基因的变异导致菌株细胞内的I 型限制酶EcoK 或EcoB 活性缺失，这对于外来基因的导入及质粒转化是有利的。 hsdS20 (rB-、mB-)，其中S20 代表特异性识别蛋白发生变异，()中的 rB-、mB-表示由于S20 的变异而导致B 株来源的hsdR 和hsdM 的功能缺失。phoA，supE44，supE (Suppressor)功能：supE 基因表达的阻遏蛋白与停止密码子UAG 结合，使蛋白质合成停止。supE 基因发生变异时，不能表达正常的阻遏蛋白，即使遇到停止密码子UAG，蛋白质合成仍能继续，并使UAG 作为一个密码子来编码谷氨酰胺（Glutamine），从而使发生了琥珀突变（AAG→UAG）的基因对蛋白质表达得以延续，因此称supE 为琥珀突变抑制因子。 supE44（sup 基因座E 的44 位突变）。如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变，则用连字符“-”代替大写字母，如trp-31。 λ-，thi-1，功能：thi 基因包含有thiA、thiB、thiC、thiD、thiK、thiL 等。thiA 表达硫氨素噻唑转运蛋白、thiB 表达硫氨素磷酸盐焦磷酸化酶、thiC 表达硫氨素嘧啶转运蛋白、thiD 表达磷酸甲基化嘧啶激酶、thiK 表达硫氨素激酶、thiL 表达硫氨素甲磷酸激酶。thi 的变异使硫氨素的生物合成不能进行，最小培养基中必须添加硫氨素（VB1），细胞才能正常生长。硫胺素代谢突变 在基本培养基上的生长需硫胺素的存在。 gyrA96，gyrA（Gyrase） 功能：gyrA 基因表达DNA 促旋酶A 亚基。DNA 促旋酶在DNA 复制时具有使DNA 解旋和回旋的作用。萘啶酮酸 (Nalidixic acid)、4-喹啉（4-Quinoline）等抗生素抑制DNA 促旋酶的活性是通过与促旋酶复合体 (A2B2)中的A 亚基的结合实现的。gyrA 基因的变异使DNA促旋酶A 亚基不能正常表达，萘啶酮酸和荧光喹啉等失去结合目标，从而使该基因型的菌株具有了对萘啶酮酸（Nalr） 和荧光喹啉的抗性。 relA1relA（Relaxed）功能：relA 是松弛调节基因，对RNA 的合成具有调节抑制作用。同时relA 基因还表达ATP：GTP3'-焦磷酸转移酶，负责在氨基酸饥饿状态下鸟苷3'，5'-二磷酸 (ppGpp) 的合成，以适应饥饿环境。 relA 基因的变异对目的基因的转录有利。 |
2楼2009-10-09 12:06:17
09021122
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3楼2009-10-09 12:47:24
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