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使用环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒，请问影响实验结果的因素？已有1人参与
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使用环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒，检测出样品对COX-2的抑制率达100%以上，请问影响该结果的因素？样品浓度是否会对结果有影响？ 发自小木虫Android客户端 |
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环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒是一种利用荧光检测，简单、快速、灵敏地用于人COX-2抑制剂高通量筛选的试剂盒。但其同时存在影响因素多的不足，现就实验操作中常见的影响因素进行分析实验，以提高的实验质量。 样品 样品是检测的前提，样品质量会直接影响实验结果。可以用试剂盒来检测的样品很多，需要注意的是，不同的待测样本中的待测蛋白浓度分布可能有所不同，因此在进行实验时，需要根据实际情况进行适当的稀释和调整，以确保在试剂盒的线性范围内进行检测。如果浓度过大，吸光度值过高，计算出的结果将有可能出现偏差。还应注意样品的pH值在7-8之间，或者确保加入样品后反应体系的pH值在7-8之间，否则会影响COX-2 Probe的稳定性和荧光值。 温度 温度主要影响抗原抗体反应，酶促反应速度及非特异性吸附，温度升高可使抗原抗体结合反应加速，但也易引起抗原抗体复合物的解离。酶促反应速度同样随温度升高而增快，但是酶蛋白变性也加快，丧失酶学活性，降低酶的有效浓度而减慢反应速度，温度低时以前者为主，高时以后者为主。 需要注意的是COX-2 Probe和COX-2 Assay Buffer需要完全解冻并回复至室温后再使用，否则会影响检测结果。rhCOX-2使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。COX-2 Substrate容易被氧化，请尽量避免长时间与空气接触。且在使用和储存过程中请注意保持低温，否则其稳定性可能会受到影响。 时间、人员操作 在温度保证的前提下，时间的控制至关重要，尤其是底物显色的时间控制，显色时间不足或过长会导致实验不成立，无法对检测结果进行判断。 加人标本、试剂及混合的时间称为操作时差。操作时差在每个试验中都存在，对结果或多或少有影响。对手工操作，尤其是样品量大的项目，从加人第一个标本到最后一个标本，需几十分钟，加人试剂及混匀存在很大的时间差异，使抗原抗体和酶促反应时间不一致，易产生假阳性、假阴性结果。 因此，样品过多时，请选择分批操作，对勿须更换移液口吸嘴的酶结合物，底物的加样可选择8联或12联专用的多道加液器。亦可避免单孔滴加底物时遗漏多加。 |
2楼2023-08-31 18:26:24