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新虫 (小有名气)

[交流] 细胞骨架染色神器——鬼笔环肽!

鬼笔环肽(又称鬼笔鹅膏素)是从毒蕈类鬼笔鹅膏中得到的有毒环状七肽,能选择性的与动植物体内的肌动蛋白结合,其作用与细胞松弛素B恰好相反,只与聚合的微丝结合,而不与肌动蛋白单体分子结合,使鬼笔环肽染色成为研究细胞内肌动蛋白微丝的有力工具,是细胞骨架的染色神器。光学显微镜下, 荧光标记过的鬼笔环肽可以清晰地显示出细胞内微丝的形态和分布,已广泛应用于生物医学研究中。

染色 · 步骤

此处以MG-63细胞爬片为例简述鬼笔环肽染色步骤:

将MG-63细胞接种在放置玻片的培养基中,37℃、5%CO2恒温培养箱中进行培养;

细胞培养至80-90%满时,用37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗细胞2次;

使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10min;

室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min;

室温条件下,用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min;

室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min;

取200µL配制好的罗丹明标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min;

用PBS清洗盖玻片3次,每次5min;

使用200µL DAPI溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约30s;

共聚焦显微镜或荧光显微镜下观察采集图像。
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