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[交流]
无缝克隆的原理
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在载体末端和引物末端应具有15-25个同源碱基（同源臂）。通过T5核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶，三种酶同时发挥功能，从而达到单片段或多片段与载体连接的技术。 T5核酸外切酶：5‘→3’端消化DNA片段， 形成粘性末端；DNA聚合酶：填补缺口； DNA连接酶：两条DNA 单链黏合起来。 |
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