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无缝克隆的原理
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在载体末端和引物末端应具有15-25个同源碱基(同源臂)。通过T5核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶,三种酶同时发挥功能,从而达到单片段或多片段与载体连接的技术。 T5核酸外切酶:5‘→3’端消化DNA片段, 形成粘性末端;DNA聚合酶:填补缺口; DNA连接酶:两条DNA 单链黏合起来。 |













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