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Aβ纤维的培养
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本人近期用Aβ建立AD体外模型，搜了很多的文献，总结之后，分别进行了如下尝试： 1.Aβ单体粉末以1mg/mL的浓度溶于HFIP中，室温分别静置1h/2h/24h或4℃分别静置1h/2h/24h（期间也有过超声）； 2.通风橱放置整夜或N2流吹干成膜，然后直接进行下一步或者冷冻干燥整夜； 3.分别不用助溶剂、2%DMSO、20毫摩尔的NaOH 溶解Aβ膜，然后分别用1XPBS（PH7.4）、HEPES缓冲液（PH7.4）、Tris-HCl（PH7.4）、生理盐水、双蒸水稀释至Aβ为20μM； 4.摇床37℃放置2天至7天。 2天后，所培养的Aβ有的有明显的纤维状沉淀物析出，有的很澄清。 问题是，在此期间用ThT染料测荧光基本都有明显变化，TEM也显示出明显的纤维状结构，但是CD显示无序结构或者不是典型的β-sheet结构，按一定浓度扩大培养之后进行PC12细胞的毒性实验（Aβ最终浓度为10μM或20μM，测试为CCK-8）,基本都没有毒性。Aβ42前后买了两家公司的，DMSO也换过超干和不同品牌的，各种缓冲液自行配制过，也买过现成的。 请问有没有大佬能看出其中细节的不足或者能否分享一下成功的方法，可有偿，非常感谢！！！ |
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