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wcs0313

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】如何使用聚酰胺柱

听说聚酰胺对黄酮类的分离效果很好，但是没用过，希望高手能指点一下，万分感谢！

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1楼 2009-10-08 17:37:48

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wuliang6898

新虫 (小有名气)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ynmyx(金币+1,VIP+0):谢谢您的回帖，鼓励积极参与交流！！ 10-8 19:05
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 10-8 19:05

看你需要分离的黄酮极性是多大的，如果是黄酮苷类的就需要用纯水平衡柱子，然后梯度洗脱就好了，如果极性小一点的黄酮可以用一定比例的甲醇水平衡，大概和反向差不多的。也可以用聚酰胺铺板，摸条件，我用的时候都是砍断，用四五个梯度冲得。效果不错的！！

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2楼2009-10-08 18:52:41

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jinlin

至尊木虫 (著名写手)

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黄酮类化合物的提取分离

★ ★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 10-8 19:06
ynmyx(金币+2,VIP+0):谢谢您的回帖，鼓励积极参与交流！！ 10-8 19:07

黄酮类化合物的提取分离
一、提取
黄酮苷和极性较大的苷元：甲醇，乙醇，甲醇-水（1：1），丙酮，乙酸乙酯。
多糖苷：沸水
花色苷：0.1%盐酸进行提取。
苷元：氯仿，乙醚，乙酸乙酯。
注意：苷类提取防止酶解。
（一）溶剂萃取法：自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。
（二）碱提酸沉法
(1) 常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH，碱性稀醇。
酸沉：盐酸
注意：酸碱浓度不宜过高。
碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生成佯盐，影响产率。
石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。但浸出效果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。
二、分离方法
分离的基本依据：
极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。
（一）柱色谱法
1、硅胶柱色谱法
适于分离异黄酮，二氢黄酮（醇）和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。
分离苷元时：氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。
分离苷时：氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水
2、聚酰胺柱色谱
适于黄酮类化合物的分离。
规律：
A：苷元相同时，以含水移动相洗脱，被吸附的强弱顺序为：苷元>单糖苷>双糖苷>双糖键苷。
B：与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易形成分子内氢键，则吸附力减弱。
查耳酮>二氢黄酮，黄酮>二氢黄酮
C：不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮>异黄酮。
D：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。
3、葡聚糖凝胶色谱法
凝胶类型：Ssephadex LH-20和Sephadex G两种类型的凝胶。
分离苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。
分离苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。
黄酮类化合物          取代基                Ve/Vo
芹菜素                5，7，4‘-三羟基       5.3
木犀草素       5，7，3‘，4’-四羟基       6.3
槲皮素          3，5，7，3'，4'-五羟基       8.3
杨梅素    3，5，7，3‘，4’，5‘-六羟基       9.2
山柰酚-3-鼠李糖基       三糖苷                3.3
半乳糖-7-鼠李糖苷
槲皮素-3-芸香糖苷       双糖苷                4.0
槲皮素-3-鼠李糖苷       单糖苷                4.9
常用的洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液、醇及含水醇
（二）PH梯度法：用不同浓度的碱分离
（三）硼酸络合法    具有邻二酚羟基的黄酮类化合物可与硼酸络合生成易溶于水的化合物。

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3楼2009-10-08 19:02:07

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