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干货分享 | 微生物检验中培养基制备的注意事项
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培养基的概述 培养基是用于保证微生物繁殖、鉴定、保持活力的物质，按照物理性质可以分成液体培养基、固体培养基、半固体培养基和脱水培养基，按照化学性质可以分成天然培养基、组合培养基和半组合培养基，按照功能可以分成选择性培养基、鉴别培养基。不同培养基要求不同，保存方式也不同。在受热、吸潮后，培养基极易被微生物污染或分解变质，需在避光、防潮、阴凉处储存。 培养基的采购验收 微生物检验需使用大量培养基。为提高检验效率，实验室多使用商品化即用型培养基、商品化脱水合成培养基。在培养基的采购中，应选择国内、外知名商家的产品，并向生产企业索要培养基成分名称、产品编号、批号、最终 pH值、储存条件、生产日期、有效期、质控报告和必要的相关信息，以保证培养基的质量。在产品交货验收时，购买者需对产品包装的完整性、生产日期、有效期和产品合格证明等进行核验，检查培养基的颜色、性质等是否符合实验室相关标准，培养基检验合格后进行入库登记。 培养基的制备 配制要求 正确按要求制备培养基是做好微生物检验的基础。实验人员使用商品化脱水合成培养基配制培养基时，要严格按照产品说明进行配制，并做好配制记录。在配制过程中，实验人员需要严格遵守相关操作标准，佩戴口罩进行操作，避免吸入含有有毒物质的培养基粉末，称量、溶解应使用专门的角匙，不使用金属制品，避免金属离子混入培养基，影响微生物生长；准确称量后，应先加入适量的水充分溶解，再加水至所需量进行加热，加热中应不断搅拌，防止培养基在容器底部积聚；调节pH值，分装到比培养基体积最少大 20%的容器中，按说明要求进行灭菌。粉末状态的培养基开封后应存放在阴凉干燥处，及时使用，环境湿度过大会使培养基出现受潮、结块、污染等情况。对于琼脂类培养基，可采用沸水浴或流动蒸汽的加热方式进行融化，但反复冻融只允许进行1次。 配制用水 水是配制培养基不可或缺的一部分，一般使用纯化水。还应定期检查培养基配制用水的微生物污染情况，应符合纯化水要求。 灭菌 灭菌能确保培养基质量达标，实验室常采用湿热灭菌法，培养基应按照产品使用说明要求进行灭菌，每次灭菌需放置压力蒸汽灭菌化学指示卡，验证灭菌效果。一些培养基可以通过煮沸的方式进行灭菌，如结晶紫中性红胆盐琼脂培养基、亚硫酸铋琼脂培养基。实验人员应及时将培养基从灭菌锅中取出，尽快冷却至所需温度，防止加热过度，对实验数据造成影响；要检查培养基的pH值、色泽、均匀度等指标，确保符合要求后贴上标签，标明名称、日期、效期等基本信息。 制备 制备平板时，将灭菌后的培养基倾注于灭菌过的干燥平皿中，在平皿中形成至少3mm的厚度，直径90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的琼脂培养基，需要保存或培养超过48h的培养基应倾注更多培养基 。培养基冷却凝固后应立即使用或储存，储存时应标记好培养基名称及制备日期，密封后放置在2～8℃冰箱中。制备斜面培养基时，应先将培养基分装到试管中，通常每管加入10mL培养基，高压灭菌，在培养基冷却凝固前将试管倾斜一定角度放置，待冷却凝固后方能使用和保存。对于液体培养基，根据使用要求直接分装至三角瓶或试管中，灭菌，冷却至室温直接使用或保存。 培养基的储存 验收入库的培养基应严格按照生产厂家标明的储存条件、保存期限、使用方法保存和使用。开封后的商品化脱水合成培养基要放置在密闭容器中保存，在瓶身注明首次开封日期 。实验室自制培养基应避光、干燥保存，需冷藏的培养基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存时间通常为2～4 周，瓶装及试管装培养基保存时间一般为3～6个月，具体效期应进行验证。每次使用培养基前，要观察颜色变化、流动性、均匀性、是否结块和是否污染等情况。如果发现培养基出现受潮、结块、其他性状明显改变的情况，应停止使用。 |
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