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每天一知识:了解”Western blot“
Western blot结果中杂带为什么那么多?
◇ 目的蛋白有多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点、乙酰化位点等),本身可以呈现多条带——查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小。
◇ 目的蛋白有其它剪切本——查阅文献或生物信息学分析可能性。
◇ 样本处理过程中目的蛋白发生降解——加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作。
◇ 上样量过高,太敏感——适当减少上样量。
◇ 一抗特异性不高——重新选择或制备高特异性的抗体。
◇ 一抗不纯——纯化抗体
◇ 一抗或者二抗浓度偏高——降低抗体浓度。
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