| 查看: 486 | 回复: 1 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者科研小dai将赠送您 5 个金币 | ||
[求助]
大佬，求助荧光光谱形状意义 已有1人参与
|
||
|
有的荧光光谱呈现好几个山峰状，那峰顶和峰谷代表什么？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
稀土发光分析｜核壳结构｜寿命拟合
已经有13人回复
-
稀土发光分析｜核壳结构｜寿命拟合
已经有6人回复
-
无机化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
稀土发光分析｜核壳结构｜寿命拟合
已经有0人回复
-
稀土发光分析｜核壳结构｜寿命拟合
已经有0人回复
-
26 届青岛大学纺织化学与染整工程硕士（液体纳米分散染料方向）求申博建议
已经有4人回复
-
26 届青岛大学纺织化学与染整工程（液体纳米分散染料）求浙理工纺织 / 材料博导名额
已经有1人回复
-
敢问Acta Pharmaceutica Sinica B with Editor 三周了，能是什么情况？
已经有0人回复
-
求助 CeO2 Fe3O4 Cu2S CoFe2O4 标准卡 Jade 导出的数据
已经有0人回复
-
招生--河北大学26年秋季入学博士
已经有1人回复
-
求助一篇MEMS散热器件文献
已经有0人回复
13813921817
木虫之王 (文坛精英)
上善若水，利万物而不争
- 应助: 8554 (教授)
- 金币: 58966.9
- 散金: 352
- 红花: 499
- 帖子: 11418
- 在线: 1131小时
- 虫号: 3562708
- 注册: 2014-11-27
- 性别: GG
- 专业: 高分子助剂
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
较为理想的熔解曲线是单峰曲线，如出现多峰有以下原因： 1）非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度 PCR 对引物退火温度（Tm值）进行优化，上调Tm值，选购质量较好的离心柱法核酸提取试剂，提高核酸提取质量，等等。 2）引物二聚体 可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体。引物二聚体在凝胶的底部形成扩散条带，通常位于100 bp以下。引物二聚体在熔解曲线内峰值一般位于75℃左右，如该峰显著请按照以下方面进行优化： A.优化扩增条件，如提高退火温度，可利用梯度PCR，摸索最佳的Tm值。通常两步循环(由 95℃变性步骤直接进入 60℃退火和延伸步骤) 有利于强效扩增，因此引物设计时设定的成功退火温度为 60℃。 B.引物浓度太高，适当降低引物浓度。通常引物的Tm低于目的基因，熔解曲线上峰值在目的基因峰的左边。大多数情况下，每条引物的理想最终浓度为200 nM，但如有需要，可将浓度降至60nM。 C.cDNA模板带有基因组DNA污染：重新制备cDNA模板。在RNA提取完成后加入DNase对RNA进行处理，然后逆转录为cDNA。 如果排除以上原因还是出现熔解曲线多峰的情况，就要考虑及时更换试剂盒，避免耽误实验进度。 |
2楼2023-07-23 17:38:23
