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vv120

新虫 (初入文坛)

[求助] 密度梯度离心无法分离纯化蛋白怎么办 已有1人参与

密度分离液用的是60%的optiprep,hepes做稀释液,梯度是15%,25%,35%,45%,手动制备,枪头一滴一滴加,每层2.8ml,样品600-1000 ul,制备密度梯度的时候肉眼可见分层,但最下面的分界线有些弥散,且液体自己会产生气泡(查了资料说是hepes见光易氧化),离心6h,转速41000r,每次离心后密度层分界线不清楚,按照加样体积取密度液,wb验证,发现各个密度层均有目的蛋白(文献说只在28-31%这两层)抗体是对抗,但之前其他实验室进行过这一步,用的抗体和这个一样,能分离并且鉴定出来,所以想求职大家问问怎么回事
另外,文献中的梯度是25-40%,每个梯度间隔为3%,我试过,但是打不出来分界线,,很容易就混到一起,也想问下这个,希望有相关方面的同学给我一些帮助,谢谢大家

@天使托 发自小木虫IOS客户端
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水晶蛋蛋

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
2楼2023-07-20 12:00:53
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