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vv120

新虫 (初入文坛)

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[求助] 密度梯度离心无法分离纯化蛋白怎么办已有1人参与

密度分离液用的是60%的optiprep，hepes做稀释液，梯度是15%，25%，35%，45%，手动制备，枪头一滴一滴加，每层2.8ml，样品600-1000 ul，制备密度梯度的时候肉眼可见分层，但最下面的分界线有些弥散，且液体自己会产生气泡（查了资料说是hepes见光易氧化），离心6h，转速41000r，每次离心后密度层分界线不清楚，按照加样体积取密度液，wb验证，发现各个密度层均有目的蛋白（文献说只在28-31％这两层）抗体是对抗，但之前其他实验室进行过这一步，用的抗体和这个一样，能分离并且鉴定出来，所以想求职大家问问怎么回事
另外，文献中的梯度是25-40％，每个梯度间隔为3％，我试过，但是打不出来分界线，，很容易就混到一起，也想问下这个，希望有相关方面的同学给我一些帮助，谢谢大家

@天使托发自小木虫IOS客户端

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