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scbio07银虫 (小有名气)
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[交流]
关于詹纳斯绿B的染色问题
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最近做实验用詹纳斯绿B染离体培养肿瘤细胞（A549），分别测试了1：100，1：300，。。。。1：5000，始终感觉染色效果不显著 细胞内似乎比染色前发亮的小点多了，但并非一般所述的那种蓝绿色啊，求达人指教。。。。。能给出详细步骤的最好。小弟感激不尽 另外问几个关于JGB染色的常识问题： 1 是不是40倍镜即可见染色效果？ 2 JGB可以染像肿瘤细胞这样，线粒体状态与正常细胞不同的吗？ 3 JGB（购自SIGMA）上标注的66%dye 是什么意思 [ Last edited by 350784478 on 2009-10-6 at 20:03 ] |
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jinlin
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scbio07(金币+2,VIP+0):好像是百度百科的，看过，恕我直言没指导意义，不过同样感谢 10-7 19:47
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詹纳斯绿 Janus Green B 别名：健那绿 化学式：C30H31N6Cl 詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。 必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法，它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以至引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下细胞形态和生理病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染和体外活染。体内活染是指把胶体状的染料注入活的动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的；体外活染又称为超活染色，是指从活的动植物体内分离出细胞或组织，用染料浸染，由于活细胞或组织内的某种结构对染料的选择性固定而着色。 不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，为了减少对细胞的伤害作用，活体染料应无毒或毒性很小，且配成稀淡的溶液。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，主要是染料的电化学特性在起作用。染料表面所带有的阳离子（碱性活体染料）或阴离子（酸性活体染料）可与被染部分所带的阴离子或阳离子相互发生了吸引作用。 根据表面所带电荷的不同，活体染料分为酸性活体染料和碱性活体染料。酸性活体染料的种类比较少，只有吡咯蓝、刚果红等几种，由于它们能沉淀到细胞质内，产生“人工效应”的假象，所以应用不多。活体染料一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）中的特性，易于被细胞吸收。最常用的活体染料是碱性活体染料，种类很多，其中詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）是两种最重要的活体染料，对线粒体和液泡系的染色各有专一性。 在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维等，因而液泡系发达。 在植物细胞中，茎尖和根尖的分生组织是液泡发生的场所。在这些细胞中，产生许多小型的原液泡，它们起源于内质网，在茎尖和根尖的后部，随着细胞的分化和增长，原液泡通过吞噬细胞质和水合作用，使之不断扩大，同时，这些小液泡又相互融合，最后形成中央大液泡。见图8－1。 中性红是一种毒性最低的活体染色剂，是液泡系的专一染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。在pH发生变化的条件下，中性红还具有转变颜色的特性：pH7.0~7.2 红色； pH7.2~7.6 橙色；pH7.6~8.0 黄色。PH不同表明液泡中酶原颗粒的成熟度的不同，完全成熟的酶原颗粒为乳白色，不再为中性红着色。 |
2楼2009-10-06 19:49:28
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scbio07(金币+1):谢谢参与
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詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 2. 1%詹纳斯绿B 溶液（原液） 称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。 |
3楼2009-12-10 09:37:08