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氨基酸薄层层析实验方法
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【实验试剂和器材】 (一) 试剂 1. 氨基酸标准液(10mg/ml)：三种氨基酸是赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸，分别配成上述浓度的溶液。 2. 氨基酸混合液（每种氨基酸5mg/ml） 3. 展层剂：正丁醇：12％氨水：95％乙醇＝13: 3: 3（V/ V） 4. 0.1%茚三酮－正丁醇液。 (二) 器材 聚酰胺薄膜，毛细管，层析装置，电吹风机，喷雾器， 塑料手套等。 【实验方法】 (一) 薄膜的剪裁 取薄膜（7cm×10cm）一张，在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一直线，在此直线上每隔1厘米作一记号为点样处（外侧两点距边缘2cm）。 (二) 点样 氨基酸的点样量以5ul为宜。点样时，用毛细管吸取氨基酸样品，与薄膜垂直方向轻轻碰点样处，每点在纸上扩散的直径最大不超过2mm。点样过程中，必须在第一滴样品干后再点第二滴。为加快样品干燥，可用吹风机吹干，注意温度不宜过高，以免损坏氨基酸。 (三) 展层 在层析缸中放一个小培养皿，培养皿中倒入适量展层剂，将点好样品的薄膜斜立于培养皿中（注意点样的一端在下），展层剂的液面需低于点样线１厘米。当溶剂前沿距上边缘１厘米处时，取出膜片，立即用笔标出溶剂前沿的位置，自然干燥或用吹风机吹干。 （四）定性鉴定 用0.1％茚三酮－正丁醇液在薄膜的一面均匀喷雾。晾干后，用一直尺测量每一显色斑点中心与原点的距离和原点到溶剂前沿的距离，求其比值，即得各种氨基酸的Rf值。 在层析图谱上，对比标准氨基酸的位置（Rf值），确定氨基酸混合样中氨基酸的种 类及位置。 【注意事项】 1. 选用合适、洁净的薄膜。勿用手直接接触薄膜。 2. 点样斑点不能太大（其直径应小于2mm）。吹风机温度不宜过高，否则斑点变黄。 3. 根据一定目的、要求，选择合适的溶剂系统。 作者：毕合生物 公众号：毕合生物 毕合生物( www.bihebio.com)提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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