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five56

新虫 (小有名气)

[交流] 载体构建求助

两个片段用无缝克隆方法进行载体构建。
载体构建拿载体引物菌p后有两种情况,一是载体序列500bp,这种很正常,没连接上;
还有一种是条带大小不对,比如目的条带大小为3000bp,菌p后是2500bp,送测序,反向测的800bp是对的,正向测800bp是错的。
正向测的800bp序列比对后,不是目的基因序列。
在构建之前,片段测序是对的
已经做过好几次了,每次都有这样的情况,且每次构建失败。
有没有类似情况的友友,求指点

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KM石头

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是有同源序列,重组了
2楼2023-07-06 15:26:48
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Giuxgyo

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
想问问楼主解决了吗,我也遇到了类似的问题
3楼2023-08-15 20:21:36
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five56

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Giuxgyo at 2023-08-15 20:21:36
想问问楼主解决了吗,我也遇到了类似的问题

没,找不到原因,暂停这个实验了

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4楼2023-08-25 20:13:27
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