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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒DNA提取中的一个溶液配制问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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piaofei3711292

木虫 (职业作家)

快乐家族-红蜻蜓

[交流] 质粒DNA提取中的一个溶液配制问题

在从大肠杆菌中提取质粒DNA时，会用到一种普通讲到的溶液1：
     我在网上搜到的一个文件中的配制中说这种溶液含有三种试剂，分别是葡萄糖，Tris•HCL和EDTA。
     但是文献中用到的都是只有Tris•HCL和EDTA。
     请问这个葡萄糖在这里边是做什么用的呢？需要不需要加呢？
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如果命运抓住了?玫暮砹�?镁湍用说母熘�
1楼 2009-10-05 14:55:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 10-5 15:57
葡萄糖用于增加溶液粘度，能够使菌体充分重悬防止过快沉降，但要是你抽质粒的量不多操作也够快的话，其实不加没有所谓的。
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2楼2009-10-05 15:07:31
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piaofei3711292

木虫 (职业作家)

快乐家族-红蜻蜓
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-10-5 15:07:
葡萄糖用于增加溶液粘度，能够使菌体充分重悬防止过快沉降，但要是你抽质粒的量不多操作也够快的话，其实不加没有所谓的。

恩，我这个操作不熟练，可能会有些问题，大概整个过程下来需要半个小时吧，不知道是不是很慢。因为需要离心，时间会长一点。
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如果命运抓住了?玫暮砹�?镁湍用说母熘�
3楼2009-10-05 15:29:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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不是，我说的时间是指重悬到裂解完毕（加溶液III之前）这一步
一开始先离心收集菌体，然后有人习惯用STE洗一遍，离心再用溶液I重悬。这里才算重悬的开始。重悬后就是加溶液II了，裂解时间主要是看菌体的量。超过50ml的菌体最好还是加葡萄糖吧，还是得裂解一段时间的。
但是如果是小抽，那完全没有必要。
其实用试剂盒抽的话也不错啊~~性价比要比手抽高，因为手抽要花的时间长，而且最后的纯度不一定很理想。
现在抽质粒的试剂盒是便宜到不行了，普通用途买个国产天根的就可以
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4楼2009-10-05 16:46:48
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houcaixia

金虫 (小有名气)
★
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我们都是用试剂盒抽提的，效果很好，省时省力，还不贵，现在使用试剂盒的话还可以提高实验的效率！
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5楼2009-10-05 20:33:43
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jjlbest

木虫 (著名写手)
★
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我觉得最好是加，我的理解是葡萄糖是一自由扩散的方式进出细胞的，这样可以增加细菌的饱和度，有利于后面的细菌的裂解，不知道对不对？
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6楼2009-10-09 11:18:28
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
其实二楼给你的答案就很对，葡萄糖只起了增加溶液浓度防止菌体过快沉降的作用，对菌体裂解没有帮助，也就更谈不上平衡或是调节渗透压的用途了
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2009-10-10 21:36:42
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piaofei3711292

木虫 (职业作家)

快乐家族-红蜻蜓
谢谢大家，学习了
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如果命运抓住了?玫暮砹�?镁湍用说母熘�
8楼2009-10-12 08:43:12
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