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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】我做MTT，我的化合物怎么没有效果啊？
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】我做MTT，我的化合物怎么没有效果啊？

我最近用MTT法做一个文献报道的有抗癌活性的化合物对PC-3细胞的细胞毒性实验，但是结果却和文献报道的不同，一点效果都没有，也不知道是怎么回事。
我是这样操作的：前一天晚上接种于96孔板（100微升），第二天给药（按照文献报道的浓度选择了高、中、低三个浓度给药10微升），分别培养24h和48h后给MTT，孵育4h后弃去上清液加DMSO，振荡10min左右后用酶标仪测0D值（490nm），结果却是空白组、对照组、实验组的OD值接近（OD值在0.7左右），几乎没有差别，我做了几次都是这样的结果，我还同时选用苦参碱和槐果碱做了下对照，苦参碱和槐果碱都有很显著的抑制细胞活力的现象。我实在是不在知道我哪里出了问题，但就是没有结果，希望大家能给点建议，谢谢！！！
还想请问下如何可以检验我的化合物与MTT是否反应？

[ Last edited by jw227 on 2009-10-4 at 21:50 ]
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1楼 2009-10-04 21:40:21
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jw227

木虫 (著名写手)

课题组长
★
richenim(金币+1,VIP+0): 10-5 17:41
是否化合物有问题，否则文献报道有问题
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我是来消遣的
2楼2009-10-05 00:26:34
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richenim

金虫 (小有名气)
jw227(金币+0,VIP+0):是否可以配合SRB法进一步确证 10-5 08:55
引用回帖:
Originally posted by jw227 at 2009-10-5 00:26:
是否化合物有问题，否则文献报道有问题

化合物表征过，没有问题。很多外文文献都是这样报道的。
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3楼2009-10-05 00:32:07
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svidy

金虫 (正式写手)
文献很多不可信的，相信的只有自己做出来的
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4楼2009-10-05 10:29:14
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tjegg

铁杆木虫 (著名写手)
★
472514568(金币+1,VIP+0):奖励积极回帖 10-5 12:28
1。很多报道有水分
2。种的细胞数目，以及细胞状态
3。药物用何种介质溶解？DMSO？多少浓度？
4。MTT虽经典，但问题多，许多文章已不用了，它有水溶性替代物MTS，可一试。
5。。。。
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除了你的亲人，没有人应该对你好，对你好的人，一定要珍惜。
5楼2009-10-05 12:08:23
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tjegg at 2009-10-5 12:08:
1。很多报道有水分
2。种的细胞数目，以及细胞状态
3。药物用何种介质溶解？DMSO？多少浓度？
4。MTT虽经典，但问题多，许多文章已不用了，它有水溶性替代物MTS，可一试。
5。。。。

我接板时一般没有细胞计数，差不多5000左右，细胞状态一直都还好。
药物用DMSO来溶解的，DMSO的最终浓度是0.1%
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6楼2009-10-05 17:47:58
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tjegg

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2009-10-5 17:47:

我接板时一般没有细胞计数，差不多5000左右，细胞状态一直都还好。
药物用DMSO来溶解的，DMSO的最终浓度是0.1%

再用MTS试试，估计可能你这个抗癌药物有问题。你买的是标准品吗？还是自己提取的？如果是上市的，查药典的方法鉴定一下。
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除了你的亲人，没有人应该对你好，对你好的人，一定要珍惜。
7楼2009-10-05 21:42:29
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tjegg at 2009-10-5 21:42:

再用MTS试试，估计可能你这个抗癌药物有问题。你买的是标准品吗？还是自己提取的？如果是上市的，查药典的方法鉴定一下。

是自己合成的，但已表征过是我的目的化合物。我现在估计知道我的问题所在了，我的化合物用DMSO溶解后再加水稀释，油层还是漂浮在上面（我的化合物是脂溶性油状物），这样的话我的化合物根本就没有溶解，我按照文献报道的用DMSO做溶剂，DMSO的最终溶度是0.1%。我试了下无水乙醇，DMF，四氢呋喃等助溶剂都不能完全溶解我的化合物，最后只有吐温80可以溶解我的化合物，但就不知道可不可以用吐温80做溶剂。
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8楼2009-10-05 22:02:18
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tjegg

铁杆木虫 (著名写手)
★
472514568(金币+1,VIP+0):奖励积极回帖交流 10-6 09:40
将吐温80加入空白孔，这样可消除它的影响。
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除了你的亲人，没有人应该对你好，对你好的人，一定要珍惜。
9楼2009-10-06 09:08:55
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lxgx0187

铜虫 (小有名气)
★
472514568(金币+1,VIP+0):奖励积极回帖！ 10-11 09:41
确实有这样的情况，前段时间做过一个单体  很多国内外文献都有报道  有抗肿瘤活性  但是做了好多文献报道有效果的细胞株，还是没有效果  而且剂量已经很大了
但是做体内抗肿瘤  还是有抑制小鼠肿瘤生长的~~~~~
具体就不知道什么原因了~~~
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10楼2009-10-11 09:27:27
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