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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌高密度发酵溶氧控制
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嘿嘿哈哈工

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌高密度发酵溶氧控制 已有3人参与

上50L罐，前期一切正常，但是诱导后4.5个小时溶氧开始降负数，8小时后发现自溶，已经做了好几罐都是这样，是压缩空气供应不足？

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1楼 2023-06-07 01:39:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

草办雨田

新虫 (小有名气)
诱导晚了，od28之前就要降温和诱导完成。控制补料和溶氧，不要长的太快。

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10楼2023-08-13 05:38:10
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摸鱼的?

铁虫 (初入文坛)
你先检查一下罐内里面是否有杂菌，检测诱导是否被消耗，补料是否过量。溶氧持续低会产乙酸，会导致出现自溶现象。

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2楼2023-06-07 08:16:38
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普通回帖

yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
染噬箘体了吧

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3楼2023-06-07 12:20:19
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后来就算

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般诱导后，OD还会上涨的。
你4.5h溶氧成复数，是否是此时补料太快；而8h开始自溶，是否是OD上升后补料未跟进导致的。

当然，你提供的信息还是有限；可以先描述一下以何种方式加的诱导剂；或者说按以下程式检查，是否做了镜检；pH的过程如何；是否起泡，粘度是否上升等等。
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什么时候积分不是零啊
4楼2023-06-07 13:55:27
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419400

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1   确认是否染菌；2  如没有染菌，估计补料过多，造成的。3
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5楼2023-06-08 08:08:09
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嘿嘿哈哈工

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 后来就算 at 2023-06-07 13:55:27
一般诱导后，OD还会上涨的。
你4.5h溶氧成复数，是否是此时补料太快；而8h开始自溶，是否是OD上升后补料未跟进导致的。

当然，你提供的信息还是有限；可以先描述一下以何种方式加的诱导剂；或者说按以下程式检查 ...

OD600达到28降温诱导，IPTG浓度0.3mM，因为当时溶氧已经控不住了，所以降温诱导，没染菌，诱导后泡沫增多，诱导后7h发酵液变淡淡的青色，取样程轻微粘稠状，目前猜测是缺氧导致，没通纯氧
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6楼2023-06-09 15:07:57
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后来就算

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 嘿嘿哈哈工 at 2023-06-09 15:07:57
OD600达到28降温诱导，IPTG浓度0.3mM，因为当时溶氧已经控不住了，所以降温诱导，没染菌，诱导后泡沫增多，诱导后7h发酵液变淡淡的青色，取样程轻微粘稠状，目前猜测是缺氧导致，没通纯氧...

1、先降温后诱导试试，此过程控制补料速度，使溶氧别下降太低，或者别长世间在负数；
2、将IPTG浓度改为0.1mM试试，能缓解自溶现象；
3、发酵液变淡淡青色，关注一下菌种转化时的质粒配比情况，上小罐时没有淡淡青色吗？
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什么时候积分不是零啊
7楼2023-06-09 15:19:13
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生物就离谱

新虫 (小有名气)
请问下在自溶是的情况是否跟果冻状，拉丝情况严重，如果拉丝严重根据我们之前的实验是载体不对，更换载体就好了。如果是噬菌体的话一般不会在培养中期出现问题。，前期就容易出现不长的情况。而且培养不需要用到纯氧，过滤后的压缩空气即可。
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8楼2023-06-11 07:43:29
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林中小路6

新虫 (初入文坛)
染噬菌体了

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9楼2023-07-27 12:45:39
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