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[交流]
荧光共振能量转移（FRET）
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一、活细胞研究遇到的问题： 蛋白质或其他分子在活细胞内互相结合的时间和地点是了解它们功能的关键问题。要回答这一问题，需将蛋白质标上不同的荧光团。但是，光学显微镜的分辨率将蛋白质检测精度限制在大约0.2μm左右。要研究蛋白质成分的相互物理作用，需要高的分辨率。 二、什么是FRET？ FRET就是采用非放射方法，在供体和受体相互靠得很近（1-10 nm）时，将光子能从一个受激发的荧光团（供体）转移到另一个荧光团（受体）。 采用FRET，可以解决超过光学显微镜分辨率限制的分子相对邻近度问题，来显示（例如）（1）二个蛋白质成分间分子相互作用；（2）一个分子内部（如酶活动能力、DNA/RNA形态）的结构变化；（3）采用象CFP-YFP Cameleon这样特别的FRET-工具的离子浓度 CFP受光激发后便发射光 CFP受光激发后但没有发射小光。 CFP离YFP的距离大于10nm CFP与YFP非常接近（1-10 nm） YFP没有受到激发，因此也不发射光 CFP没有受光激发，但发射光 三、FRET原理 受激发后的荧光团（供体）将受激发的静能转移到一个光吸收分子（受体）。这种能的转移是非放射性的，其主要原因是供体和受体之间的偶极-偶极间的相互作用。通过双偶极反应，一个处于激发态的供体以非激发方式将能量传递给旁边的受体。 这一理论基于将被激发荧光分子看成振荡偶极子，能够和有同一震荡频率的另一个偶极子发生能量交换。 只有几个荧光团对才适合FRET实验，因为，除了其他必要条件（如偶极子定向、足够的荧光寿命），供体放射光谱必须将受体的激发光谱重叠起来。已知的FRET对是CFP/YFP、BFP/GFP、GFP/诺丹明、FITC/Cy3 作者：毕合生物 公众号：毕合生物 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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