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小鼠脾脏做流式细胞术的疑问
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第一次做流式细胞术，有些地方不确定特来请教。我的实验是用病毒的某个蛋白做成疫苗，现在是在BALB/c小鼠上验证免疫效果。 目前打算是取脾脏通过流式来检验免疫效果，看到网上和文献里常做的一些指标就是CD3、CD4、 CD8等细胞表面标志物，还有细胞内的一些因子如IFNr、IL2、IL10等。 我的问题是，流式或者类似的elispot实验中，都需要在取脾细胞后加入抗原刺激细胞吗？ 如果需要的话，是加完整的抗原蛋白进去还是加抗原蛋白的多肽库呢？因为我看的一篇文献里是用的多肽库。 但是我查到我做的这个蛋白，多肽库只在国外有，一万多，太贵了而且货期很长，总体来讲不现实。 另外常用的刺激阻断剂，离子霉素和PMA等是什么作用呢？离子霉素和PMA是作为阳性对照吗？阳性对照的作用 是验证我的细胞状态没问题对吗？我理解是类似于WB实验的内参蛋白，不知道是否正确？ 最后我可以不加抗原刺激，直接用离子霉素和PMA刺激细胞吗?这样是不是就做不了阳性对照？ 或者我可以用完整的抗原蛋白加进去刺激吗？因为我查一些资料显示抗原在细胞内被分解为多肽呈递给T细胞发挥作用。 所以是不是只能加多肽进去才能刺激T细胞？ 本人第一次接触流式，问了几家公司的技术也整不明白，恳请各位大佬不吝赐教，万分感谢！ |
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