| 查看: 725 | 回复: 0 | |||
[交流]
抗体保存好，实验失败少
|
|
一、保存温度和条件 很多抗体的最佳保存条件是分装成小包装冻存于-20°C或-80°C。分装能使冻融引起的损失减到最小，同时可避免多次在一个管内取样而由枪头引入的污染。分装冻存的抗体，融解一次后剩余抗体应保存于4°C。收到抗体后，应10,000 x g 离心20秒，使管口螺纹内的抗体溶液全部离心至管底，用低蛋白吸附性的微量离心管分装。分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不能少于10μl；分装量越少，由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。 除了腹水液含蛋白酶应立即冻存外，大多数抗体接收后可在4°C保存一至两周，随后可冻存以长期保存。同样，应按照说明书推荐的条件进行保存。 二、特殊情况 1、酶联抗体，不应冻存，4°C可保证稳定。冻融会降低酶的活性，同时影响抗体的吸附能力。 2、偶联标记的抗体，无论是标记的荧光染料、酶还是生物素，都应保存于深色的管内并包裹上铝箔。如果暴露在光线下可能会减弱偶联标记物的活性。荧光标记物尤其容易受到光漂白作用，整个实验过程中均应避光。 3、免疫球蛋白G3同种型抗体冻融后易形成聚合物，因此应一直保存于4°C。 4、用叠氮化钠防止污染 为防止微生物污染，在抗体溶液中应加入叠氮化钠，终浓度为0.02%（质量百分比）。 5、什么时候不能用叠氮化钠 如果用抗体标记活细胞，或用于体内实验，确保所用制剂中不含叠氮化钠。这种抗生素对大多数有机体都有毒性：会阻断细胞色素电子传递系统的信号。 叠氮化钠会干扰胺基的偶联标记，应在进行标记之前将其除去。标记后抗体可保存于叠氮化钠，也可用不含胺基的硫柳汞替代。叠氮化钠可用透析或凝胶过滤法从抗体溶液中除去。免疫球蛋白 G的分子量是150,000 kDa（免疫球蛋白M的分子量是600,000 kDa），叠氮化钠的分子量是65道尔顿。使用14,000 kDa的微量透析装置，随着叠氮化钠的扩散，抗体将保留。将带有烧杯的磁力搅拌器置于4°C搅拌透析装置6小时 , 每毫升抗体溶液要用至少1升的磷酸盐缓冲液。更换2次磷酸盐缓冲液，每次均搅拌至少6小时。如果可以的话，所有材料均要求无菌，所有溶液都应无菌配制。 三、冻存 / 复苏的损失 反复冻融可使抗体变性，使其形成聚合物而降低了抗体结合能力。 大多数抗体在-20°C保存就足够了，没有必要置于-80°C保存。千万不要使用无霜的冰箱。反复冻融能减少霜的形成，但这正是应该避免的。同理，抗体应该放置于冰箱中温度变化最小的部位，如应放置于冰箱格里，而不应放置于冰箱门上。 稀释至工作浓度的抗体最好不要在4°C保存超过一天时间。通常蛋白质在较高浓度保存时不易发生降解，理想浓度为1mg/ml或更高，因为抗体溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白质稳定剂。加入的蛋白可吸附于管壁从而使抗体的损失减到最小。对用于聚合的抗体，不应加入蛋白稳定剂，因为其可能会与抗体竞争而降低抗体的聚合活性。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
