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basdsdbks

新虫 (初入文坛)

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[交流] ［求助］构建载体连接问题已有2人参与

目的片段(1653bp)要连到载体(13612bp)上，用的T4酶连接，10ul体系。连接转化大肠杆菌后，过夜培养后大肠杆菌长出单菌落，有菌落生长，基本有的单菌落都挑了进行PCR，但PCR显示都没连接上。
这是什么问题，单菌落不能全是空载和自连的吧。可能会是那方面有问题呢？求助求助求求了孩子在这关要死了

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1楼 2023-05-17 21:56:52

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wenting8918

木虫 (正式写手)

小硕

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专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

抗性薄弱的地方可能长卫星菌落。重连或交给合成公司构建

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永远幸福，幸福永远

2楼2023-05-28 10:05:59

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打工人小欢

铁虫 (初入文坛)

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是不是都进行了双酶切，另外目的片段和载体的比例是怎样的，要根据公式算一下最佳比例。

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3楼2023-06-08 14:57:05

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