| 查看: 743 | 回复: 1 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者high_dwarf将赠送您 5 个金币 | |||
[求助]
微生物细胞色素c样品提取方法 已有1人参与
|
|||
|
大佬们，近期购买了个elisa的微生物细胞色素c试剂盒 但是样品提取方法说明书没有给 有没有大佬能够提供相关样品提取方法或者参考文献 求求了 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有15人回复
-
中青基了要发朋友圈吗？
已经有3人回复
-
国自然评审意见
已经有19人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
酸程程之
铁虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 245.1
- 散金: 1
- 帖子: 104
- 在线: 35.7小时
- 虫号: 30223540
- 注册: 2022-07-19
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
一、液体样本 液体样本处理原则：所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），如果以后碰到其他的液体样本，也按这个方法，纳入汇总表。 血液经抗凝处理后的全部血液为全血；离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆。 如血液不经抗凝处理，让其自行凝固，则在抽血后的一段时间内，血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，血液首先凝固成一个整体，再经过一段时间或用离心机离心，血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开，这些液体称为血清。 血清与血浆从表面上看似乎没有什么不同，但其内在的主要区别是血清中不含纤维蛋白原，是未经抗凝处理过的血液凝固后得到的。 抽血做化验中常遇到某些化验要求用血清测定、用全血测定、用血浆测定，即是指血液标本的三种主要处理方式和要求。 Part.1 血清 用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 Part.2 血浆 应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 Part.3 尿液 用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 Part.4 胸腹水 用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 Part.5 脑脊液 用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。(（采集大鼠脑脊液）的方法：采集脑脊液时，用湿纱布擦试大鼠颈背部皮肤，剪去背毛暴露皮肤。两耳连线剪一横切口((1. 5cm左右)，在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm，将皮分离两侧，扩大视野。紧贴大鼠头骨依次逐层剪切各肌层，并断端依次拉向尾侧扩大视野。注意，有出血时用干纱布按压止血，保持术口清晰。接近颈后黄韧带时，小心地用7号注射针头分离附盖的肌肉，暴露寰枕膜。用lml注射器(针头用止血钳使针尖与针体成150度钝角)，针斜面向上，针尖端近水平刺入蛛网膜下腔，固定针体，缓慢抽取脑脊液，一般采集量为100-200微升。) Part.6 唾液 用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 Part.7 细胞培养上清 检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 Part.8 全血 用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。 二、固体样本 固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。 Part.1 组织标本：用预冷的PBS (0.01 M.pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂(10mg组织+100微升PBS+10微升蛋白酶抑制剂) )加入玻璃匀浆器中，在冰 上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液5000xg离心5-10分钟，取上清检测。 Part.2 细胞内蛋白样本：许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。 1、培养的细胞：A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 2、组织的细胞：切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。 标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 V我 189-5972-1209 |
2楼2023-05-15 10:10:24
