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开心小不点

铜虫 (小有名气)

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专业: 食品质量与安全

[交流] 免疫荧光没有效果，急急急！！！！

各位高手好，我最近在做小鼠舌石蜡切片免疫英光，我以前均可以作出很理想的图片，但是最近不知道为什么总是做不出来效果，开始我怀疑是一抗或组织出了问题，所以我先换了另外一种抗体尝试，没有作出荧光反应，换了没有施加药物的组织，也没有效果，我就怀疑可能是试剂盒除了问题，结果联系了试剂公司，他们做过检测，试剂盒没有问题。他们给了我他们检测的实验过程，我按照他们给的步骤做了一次还是没有效果，真不知道还有什么原因可能造成我做不出结果。
我的实验过程如下，我使用的抗体为兔的多克隆抗体，我实验来了来自于小鼠，请大家帮我看看：
石蜡切片脱蜡到水
H2O2＋甲醇封闭，蒸馏水冲洗
抗原修复，PBS冲洗
滴加非正常的山羊血清孵育，不洗，
加一抗，一抗浓度1：100，冰箱过夜，
冲洗后加二抗，冲洗
避光加入SABC-Cy3,冲洗后封片。

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