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mchotdogzsj木虫 (小有名气)
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[求助]
关于基因检测项目设备和实验条件的求助
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请问以下检测项目分别需要什么样的设备、实验条件又是如何？谢谢啦！ 1. 单核苷酸多肽性（SNP）分型测序； 2. 基因甲基化（Methylation）位点检测； 3. 毛细管电脉（STR/SSR/AFLP/T-RFLP）基因检测； 4. CpG甲基化位点定量检测； 5. 转录组mRNA水平突变点定量检测； |
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mchotdogzsj
木虫 (小有名气)
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3楼2023-04-17 09:33:07
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1. 单核苷酸多肽性（SNP）分型测序： 设备：高通量测序仪（如Illumina HiSeq X Ten、Illumina NovaSeq等）。 实验条件：需要对DNA样本进行提取和纯化。提取的DNA需要经过PCR扩增后，再进行SNP位点的检测。PCR扩增条件根据不同的实验方案可以不同，但对于准确测序而言，一般需要控制模板数量、引物比例、反应体系组成、PCR产物长度等因素，并进行适当优化。测序过程中还需要质控样品、建立文库、进行高通量测序以及数据分析等步骤。 2. 基因甲基化（Methylation）位点检测： 设备：一般采用芯片（如Illumina HumanMethylation450 BeadChip）或者高通量测序仪。 实验条件：需要对DNA样本进行提取和纯化。将提取的DNA转化为亚甲基化的状态，并使用甲基化特异性酶或芯片等方法来检测靶向CpG岛区域的甲基化状态。在实验前要注意去除RNA和蛋白质的干扰以及控制反应条件等因素。 3. 毛细管电脉（STR/SSR/AFLP/T-RFLP）基因检测： 设备：毛细管电泳仪、PCR仪、荧光定量PCR仪等。 实验条件：需要对DNA样本进行提取和纯化。根据不同的实验方案，可以采用STR（短串联重复序列）、SSR（微卫星重复序列）、AFLP（扩增片段长度多态性）和T-RFLP（限制性片段长度多态性）等方法进行检测。检测过程中需要进行PCR扩增、荧光标记等处理，并通过毛细管电泳进行分析。 4. CpG甲基化位点定量检测： 设备：一般采用荧光定量PCR仪或者数字聚合酶链式反应(NaPy)技术。 实验条件：需要对DNA样本进行提取、纯化并转化为亚甲基化的状态。在PCR反应体系中加入特异性引物及探针，利用特异性融合温度来选择CpG甲基化位点进行定量检测。 5. 转录组mRNA水平突变点定量检测： 设备：高通量测序仪及其所需的前置设备（如RNA提取仪、RNA质量和纯度检测仪器、RNA处理相关试剂等）。 实验条件：需要对样品进行RNA提取和纯化。在检测突变点时，需要对RNA样本进行转录、反转录等处理，并在PCR扩增过程中使用特异性引物和探针来选择目标基因，并通过高通量测序技术对其进行测序。在实验中还需要对数据进行质控、去除低质量序列、比对参考基因组或转录组的序列等步骤。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-04-16 12:58:12
