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尛哲仙聖

新虫 (初入文坛)

[交流] miRNA靶基因验证,双荧光素酶报告基因实验

miRNA靶基因验证,双荧光素酶报告基因实验
实验分组说明:
miRNA(目的miRNA)
miRNA-NC(阴性对照)
pmir-GLO(报告质粒空载)
pmir-WT(加了含靶基因结合位点的3'UTR片段)
结果:
miRNA能显著降低pmir-WT的荧光素活性,符合预期。然而,miR-NC也能使得pmir-WT的荧光素活性下降,此处百思不得其解。
难道是加上去的序列片段能直接影响质粒上荧光素酶活性?
更改3'UTR长度重新构建报告质粒,结果还是一样。
又进行实验,更换转染试剂进行对比,更换双荧光素酶检测盒子进行对比,结果均得到miR-NC也能使得pmir-WT的荧光素活性下降。
有没有友友遇到同样情况的,请教一下怎么处理才行

miRNA靶基因验证,双荧光素酶报告基因实验
3'UTR片段1


miRNA靶基因验证,双荧光素酶报告基因实验-1
3'UTR片段2
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