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nfkjdx123

新虫 (初入文坛)

[求助] 人肝脂肪酸转运蛋白和NBD胆固醇无法结合,求助应该怎么办

正在做NBD胆固醇和人FABP1的解离常数测定,人FABP1的浓度为200nM,NBD胆固醇浓度从40-10000nM,但是相对于空白对照组(buffer+探针),并没有观察到荧光强度的增强,即NBD胆固醇和人FABP1并没有发生结合,和文献不符。我的buffer使用的是30mM Tris-HCl 100mM NaCl ph=7.8,温度37℃,孵育一小时,探针NBD胆固醇经过质谱和光谱最适宜激发波长测试,应该也没问题。求问这样的情况常见吗?会是蛋白的问题吗?会是反复冻融造成蛋白都失活了吗?

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