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水深及膝

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物蛋白的分离鉴定已有1人参与

目前在做一种植物蛋白的分离鉴定,目标是将原料中4种蛋白(Native page是四条带)给分出来并进行鉴定,参考文献中的方法使用碱提酸沉法提取蛋白,pI约4.5-5,使用了DEAE纤维素和DEAE琼脂糖凝胶,缓冲液用了pH6.8的PBS和pH8.0的Tris,梯度洗脱时都只有一个峰,收集洗脱峰跑Native page时还有三条带,这种情况该如何处理呀,是哪一步出现了问题?
前两天换了强阴离子填料,缓冲液用的pH8.0的tris,效果还是不好(??-??)
到底该怎么办呀呜呜

@cgjlove @是水货 发自小木虫Android客户端
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水深及膝

新虫 (初入文坛)

看别人文章中的方法,感觉用离子交换柱层析很容易就能分出来几个明显的峰形,但是自己做却怎么也分不出来

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2楼2023-04-01 16:07:35
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.白皓轩

新虫 (小有名气)

分子量差别大吗?分子量差别大的话,选择适当的葡聚糖凝胶(凝胶过滤)也可以分离出来

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3楼2023-04-01 20:23:33
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水深及膝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by .白皓轩 at 2023-04-01 20:23:33
分子量差别大吗?分子量差别大的话,选择适当的葡聚糖凝胶(凝胶过滤)也可以分离出来

Native page中两个条带分子量大概在120KD、200KD,还有2个大于245KD,之前用了G100的葡聚糖凝胶,不知道是我的操作问题还是如何,效果也不好

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4楼2023-04-01 20:33:03
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.白皓轩

新虫 (小有名气)

5楼2023-04-01 23:50:28
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水深及膝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by .白皓轩 at 2023-04-01 23:50:28
洗脱液浓度多大啊?

缓冲液是0.02M,梯度洗脱是0-0.7M的Nacl,总的洗脱体积大概1000ml,流速2ml/min

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6楼2023-04-02 15:21:55
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水深及膝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by .白皓轩 at 2023-04-01 23:50:28
洗脱液浓度多大啊?

过葡聚糖凝胶柱时用的缓冲液

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7楼2023-04-02 15:22:43
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愿好_

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 水深及膝 at 2023-04-02 15:21:55
缓冲液是0.02M,梯度洗脱是0-0.7M的Nacl,总的洗脱体积大概1000ml,流速2ml/min
...

这个会不会是流速太大的原因啊?
8楼2024-07-13 21:02:43
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