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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 植物蛋白的分离鉴定
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水深及膝

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物蛋白的分离鉴定 已有1人参与

目前在做一种植物蛋白的分离鉴定，目标是将原料中4种蛋白（Native page是四条带）给分出来并进行鉴定，参考文献中的方法使用碱提酸沉法提取蛋白，pI约4.5-5，使用了DEAE纤维素和DEAE琼脂糖凝胶，缓冲液用了pH6.8的PBS和pH8.0的Tris，梯度洗脱时都只有一个峰，收集洗脱峰跑Native page时还有三条带，这种情况该如何处理呀，是哪一步出现了问题？
前两天换了强阴离子填料，缓冲液用的pH8.0的tris，效果还是不好（??-??）
到底该怎么办呀呜呜

@cgjlove @是水货 发自小木虫Android客户端
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1楼 2023-04-01 16:01:16
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水深及膝

新虫 (初入文坛)
看别人文章中的方法，感觉用离子交换柱层析很容易就能分出来几个明显的峰形，但是自己做却怎么也分不出来

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2楼2023-04-01 16:07:35
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.白皓轩

新虫 (小有名气)
分子量差别大吗？分子量差别大的话，选择适当的葡聚糖凝胶（凝胶过滤）也可以分离出来

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3楼2023-04-01 20:23:33
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水深及膝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by .白皓轩 at 2023-04-01 20:23:33
分子量差别大吗？分子量差别大的话，选择适当的葡聚糖凝胶（凝胶过滤）也可以分离出来

Native page中两个条带分子量大概在120KD、200KD，还有2个大于245KD，之前用了G100的葡聚糖凝胶，不知道是我的操作问题还是如何，效果也不好

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4楼2023-04-01 20:33:03
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.白皓轩

新虫 (小有名气)
洗脱液浓度多大啊？

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5楼2023-04-01 23:50:28
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水深及膝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by .白皓轩 at 2023-04-01 23:50:28
洗脱液浓度多大啊？

缓冲液是0.02M，梯度洗脱是0-0.7M的Nacl，总的洗脱体积大概1000ml，流速2ml/min

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6楼2023-04-02 15:21:55
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水深及膝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by .白皓轩 at 2023-04-01 23:50:28
洗脱液浓度多大啊？

过葡聚糖凝胶柱时用的缓冲液

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7楼2023-04-02 15:22:43
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愿好_

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 水深及膝 at 2023-04-02 15:21:55
缓冲液是0.02M，梯度洗脱是0-0.7M的Nacl，总的洗脱体积大概1000ml，流速2ml/min
...

这个会不会是流速太大的原因啊？
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8楼2024-07-13 21:02:43
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