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bingdong05

银虫 (正式写手)

[交流] 做酶切时,怎么确定加入酶的量

做酶切反应时,怎么样来确定需要加入的酶的量呢?希望知道的虫友们能给解答下哈,不胜感激
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gyesang

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amisking(金币+2,VIP+0): 9-25 21:45
20微升体系,10U/ul或20U/ul的酶加1ul,模板加400-1000ng
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-09-25 20:34:35
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 9-25 21:45
20微升体系20U/ul的酶加1ul,一般是这样的操作,不过建议你严格安说明书进行酶切,如果不行再改变自己的模板量进行摸索。
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
3楼2009-09-25 21:03:22
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


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根据你的DNA量的多少加~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2009-09-25 21:18:48
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zeqyanyan

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+4,VIP+0): 9-25 21:45
质粒酶切与DNA酶切是不一样的哦!建议你把信息说全,大家一起来解决!质粒酶切如上面所说20ul 体系加1 ul 即可,若是对DNA进行酶切实验的话,体系最好为50ul 体系,加入2ul的酶。
5楼2009-09-25 21:23:32
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695

木虫 (职业作家)


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一般不超过体系的1】10
6楼2009-09-25 21:40:36
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kitty8682

金虫 (正式写手)


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说明书上讲的很详细,在多少体系里加入多少酶量,反应多长时间等
7楼2009-09-26 08:58:39
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bioxixi

木虫 (著名写手)


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说明书上都有推荐用量,一般质粒酶切如上面所说20ul 体系加1 ul 即可,1 ul 是总酶量,即如果用两种酶则每种加0.5ul,50ul体系则加2ul就够了
加多了会影响反映,
8楼2009-09-26 09:19:12
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gyesang

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还要看你做什么酶切反应,如果是做质粒的酶切反应,20ul体系,10U的酶切2个小时足够了,有些酶像XhoI,HindIII切30分钟就行了,如果你做southern,消化基因组DNA的话,建议20ul体系,因为受上样量的影响,酶20U,此外加1ul,1.25mM/ul的spermidine,切4-10小时都可以
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9楼2009-09-26 10:12:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

说明书写得非常清楚
10楼2009-09-26 10:34:55
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