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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做酶切时，怎么确定加入酶的量
汕头大学海洋科学接受调剂
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bingdong05

银虫 (正式写手)

[交流] 做酶切时，怎么确定加入酶的量

做酶切反应时，怎么样来确定需要加入的酶的量呢？希望知道的虫友们能给解答下哈，不胜感激
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1楼 2009-09-25 20:21:07
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 9-25 21:45
20微升体系，10U/ul或20U/ul的酶加1ul，模板加400-1000ng
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-09-25 20:34:35
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經天

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 9-25 21:45
20微升体系20U/ul的酶加1ul，一般是这样的操作，不过建议你严格安说明书进行酶切，如果不行再改变自己的模板量进行摸索。
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
3楼2009-09-25 21:03:22
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
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根据你的DNA量的多少加~
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2009-09-25 21:18:48
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zeqyanyan

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+4,VIP+0): 9-25 21:45
质粒酶切与DNA酶切是不一样的哦！建议你把信息说全，大家一起来解决！质粒酶切如上面所说20ul 体系加1 ul 即可，若是对DNA进行酶切实验的话，体系最好为50ul 体系，加入2ul的酶。
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5楼2009-09-25 21:23:32
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695

木虫 (职业作家)
★
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一般不超过体系的1】10
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6楼2009-09-25 21:40:36
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kitty8682

金虫 (正式写手)
★
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说明书上讲的很详细，在多少体系里加入多少酶量，反应多长时间等
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7楼2009-09-26 08:58:39
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
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说明书上都有推荐用量，一般质粒酶切如上面所说20ul 体系加1 ul 即可，1 ul 是总酶量，即如果用两种酶则每种加0.5ul，50ul体系则加2ul就够了
加多了会影响反映，
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8楼2009-09-26 09:19:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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★
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还要看你做什么酶切反应，如果是做质粒的酶切反应，20ul体系，10U的酶切2个小时足够了，有些酶像XhoI，HindIII切30分钟就行了，如果你做southern，消化基因组DNA的话，建议20ul体系，因为受上样量的影响，酶20U，此外加1ul，1.25mM/ul的spermidine，切4-10小时都可以
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9楼2009-09-26 10:12:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
说明书写得非常清楚
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10楼2009-09-26 10:34:55
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